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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 恳求各位大神支招，我快崩溃了！！！
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shuihaizi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-18 15:48:39
1，先拿你们实验室已有的，一定能够扩增出来的引物，进行一次PCR,目的是确定酶的反应体系没问题，而且你个人的技术没问题
2，如果以上没问题呢，开始扩增你自己的目的片段：可以适当增加引物的用量（2倍或4倍），试试，
（模板就用1中你用过的模板）
祝好运!
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11楼2014-08-17 20:12:24
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1217189746

新虫 (初入文坛)
重新提DNA，重新做，试剂换新的，再试一遍。
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情不知所起 一往而深
12楼2014-08-17 21:30:34
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小松果2012

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by prominetsun at 2014-08-17 10:30:49
难道所有引物都不行了？我最后验证还专门找了个之前好P的片段，跟我的引物是不同的。而且我的引物7月份刚到，现在就出问题了？。。。。。
...

引物不稳定吧。
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13楼2014-08-17 23:42:34
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vapordw

新虫 (初入文坛)
有么有考虑是PCR仪出问题了- - 整个实验室其他人P的结果都好好的么？
如果不是仪器问题，可能就是引物出问题了吧- -也许放假的时候停电，然后 一个冰箱里的东西都化了了了了啦了
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14楼2014-08-18 14:59:57
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trizol11

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
prominetsun(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-18 15:49:04
你的模板换一下，
还有就是你的循环数是多少，我建议用热启动法跑一次PCR
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任重道远……
15楼2014-08-18 15:15:05
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prominetsun

金虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by trizol11 at 2014-08-18 15:15:05
你的模板换一下，
还有就是你的循环数是多少，我建议用热启动法跑一次PCR

35～个循环，模板换过不管用，热启动做过了一样。。。。

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16楼2014-08-18 15:36:45
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prominetsun

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by vapordw at 2014-08-18 14:59:57
有么有考虑是PCR仪出问题了- - 整个实验室其他人P的结果都好好的么？
如果不是仪器问题，可能就是引物出问题了吧- -也许放假的时候停电，然后 一个冰箱里的东西都化了了了了啦了

一个师兄P出来了但是条带较浅。。。我们实验室两台我都没P出来。。。去其他实验室做也没有。。。

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17楼2014-08-18 15:38:10
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凤丫头1988

银虫 (初入文坛)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-20 15:40:03
引物合成不都是2OD的吗？另一管干粉呢？你先换个Taq酶扩扩看，Taq酶好扩一些（Taq酶便宜）。再或者扩个梯度，尝试不同的退火温度，水最好也分装之后用。是提的什么的DNA做模板啊？模板跑胶正常吗？
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最小的事情也要尽力
18楼2014-08-19 21:49:00
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prominetsun

金虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 凤丫头1988 at 2014-08-19 21:49:00
引物合成不都是2OD的吗？另一管干粉呢？你先换个Taq酶扩扩看，Taq酶好扩一些（Taq酶便宜）。再或者扩个梯度，尝试不同的退火温度，水最好也分装之后用。是提的什么的DNA做模板啊？模板跑胶正常吗？

师兄只给了一管。。。DNA是酵母全基因组，基因组并没有跑胶。。。求问全基因组也可以跑胶的吗？不是没什么意义么。。。正常的话条带是什么样的？退火温度之前这个温度是能P出来的。。不知为什么现在就做不出来了。。。

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19楼2014-08-19 22:12:29
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Joicy

木虫 (初入文坛)
我也遇到这样的问题，之前人家P出了正确的条带，一个月后我来做，怎么都P不出正确的条带，但是有条带，而且很单一。后来换了各种程序，换引物、模板，换酶，P出来的条带还不是正确的，我都快急死了。
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20楼2014-08-20 09:47:53
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