【答案】应助回帖

11楼2014-08-17 20:12:24

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新虫 (初入文坛)

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重新提DNA，重新做，试剂换新的，再试一遍。

情不知所起一往而深

12楼2014-08-17 21:30:34

小松果2012

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3楼: Originally posted by prominetsun at 2014-08-17 10:30:49
难道所有引物都不行了？我最后验证还专门找了个之前好P的片段，跟我的引物是不同的。而且我的引物7月份刚到，现在就出问题了？。。。。。
...

引物不稳定吧。

13楼2014-08-17 23:42:34

vapordw

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有么有考虑是PCR仪出问题了- - 整个实验室其他人P的结果都好好的么？
如果不是仪器问题，可能就是引物出问题了吧- -也许放假的时候停电，然后一个冰箱里的东西都化了了了了啦了

14楼2014-08-18 14:59:57

trizol11

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【答案】应助回帖

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prominetsun(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-18 15:49:04

你的模板换一下，
还有就是你的循环数是多少，我建议用热启动法跑一次PCR

任重道远……

15楼2014-08-18 15:15:05

prominetsun

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15楼: Originally posted by trizol11 at 2014-08-18 15:15:05
你的模板换一下，
还有就是你的循环数是多少，我建议用热启动法跑一次PCR

35～个循环，模板换过不管用，热启动做过了一样。。。。

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16楼2014-08-18 15:36:45

prominetsun

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14楼: Originally posted by vapordw at 2014-08-18 14:59:57
有么有考虑是PCR仪出问题了- - 整个实验室其他人P的结果都好好的么？
如果不是仪器问题，可能就是引物出问题了吧- -也许放假的时候停电，然后一个冰箱里的东西都化了了了了啦了

一个师兄P出来了但是条带较浅。。。我们实验室两台我都没P出来。。。去其他实验室做也没有。。。

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17楼2014-08-18 15:38:10

凤丫头1988

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★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-20 15:40:03

引物合成不都是2OD的吗？另一管干粉呢？你先换个Taq酶扩扩看，Taq酶好扩一些（Taq酶便宜）。再或者扩个梯度，尝试不同的退火温度，水最好也分装之后用。是提的什么的DNA做模板啊？模板跑胶正常吗？

最小的事情也要尽力

18楼2014-08-19 21:49:00

prominetsun

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18楼: Originally posted by 凤丫头1988 at 2014-08-19 21:49:00
引物合成不都是2OD的吗？另一管干粉呢？你先换个Taq酶扩扩看，Taq酶好扩一些（Taq酶便宜）。再或者扩个梯度，尝试不同的退火温度，水最好也分装之后用。是提的什么的DNA做模板啊？模板跑胶正常吗？

师兄只给了一管。。。DNA是酵母全基因组，基因组并没有跑胶。。。求问全基因组也可以跑胶的吗？不是没什么意义么。。。正常的话条带是什么样的？退火温度之前这个温度是能P出来的。。不知为什么现在就做不出来了。。。

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19楼2014-08-19 22:12:29

Joicy

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我也遇到这样的问题，之前人家P出了正确的条带，一个月后我来做，怎么都P不出正确的条带，但是有条带，而且很单一。后来换了各种程序，换引物、模板，换酶，P出来的条带还不是正确的，我都快急死了。

20楼2014-08-20 09:47:53