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zhouxianglzy新虫 (小有名气)
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[求助]
分离寡糖和多肽 已有2人参与
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| 怎么样分离灭活的多肽和寡糖的混合物，二者分子量都在4000D 左右 C18柱可以吗？ |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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zhouxianglzy
新虫 (小有名气)
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5楼2014-09-18 18:00:20
jiangdaohang
禁虫 (著名写手)
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2楼2014-08-08 21:27:55
凌波丽
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【答案】应助回帖
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zhouxianglzy: 金币+10 2014-09-10 16:58:53
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zhouxianglzy: 金币+10 2014-09-10 16:58:53
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C18柱是反相柱，是由非极性的18碳烷基链通过硅烷化反应共价结合到硅胶（多孔微粒硅胶）上，构成固定相。 一般分辨率还比较高，可以试试，分离不出来也不会损失样品。如果体积比较大，可以先上离子交换层析柱。 注意：一般的反相柱的流动相的极性比较大，否则，样品分子的疏水面不能与多孔微粒硅胶上的非极性的18碳烷基侧链（疏水链）以疏水相互作用而结合到一起，但是流动相的选择要注意一般不要用酸性流动相，因为硅胶很溶解于酸中，另外要考虑多肽和寡糖对于酸碱性的承受能力，不好把握，可以用梯度加大中性盐的浓度的方式来操作，洗脱使用疏水洗脱试剂（比如咪唑等）。因为现在的 C18反相柱的液相层析的实验指导基本上都是搞化工的分离有机小分子背景的研究者写的，他们设计流动相时许多时候没有考虑到生物分子的特性。 |
4楼2014-08-11 12:21:55
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