| 查看: 1855 | 回复: 7 | |||
[求助]
想要证明一个启动子是受到氧气调控，怎么设计基因敲除？ 已有1人参与
|
|
我们做微生物，想证明一株叫做HS01的嗜水气单胞菌其中一个启动子受到氧气刺激而调控（我们知道这个启动子的序列），即有氧气的时候它就会调控后续基因表达，没有氧气就不表达。 我们应该证明哪几点？ 一：要证明氧气可以调控这个启动子 二：要证明氧气不是直接作用在下游序列上，而是启动子上。 我们打算这么做： 1：我们想把这段启动子序列导入到质粒当中，让它调控另一段基因的表达，比如某个显色的基因，看看是不是这个显色基因也受氧气影响，那就证明了这段启动序列是受氧气调控的。即证明第一点。 2：我们想用一个新的启动子，比如受光控制的启动子，与原有的启动子的上下游序列构建一个质粒，即用新启动子代替原来的，然后将这个质粒导入到已敲除原启动序列的HS01当中，得到一株新的敲除菌。新菌不再受氧气调控，而是受光调控，这样就证明了氧气是作用在启动子上，而不是下游序列上。证明第二点。 有个国外实验室给我们回邮件，说可以这么做，我觉得这只能证明我所说的第一点，各位看看： Alternatively, we can structure a donor plasmid with following sequence(也就是构建一个换掉启动子序列的质粒). and a crispr/cas9 palsmid targets to your regulator. Then ,you transform the plasmids into Aeromonas hydrophila strain s1. You will achieve the purpose of the experiment. 我说的方案需要构建两株突变菌，我说的那样做对吗？有必要那么麻烦吗？ 外国实验室这样做，只需要构建一株突变菌，对吗？能证明氧气的调控吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有277人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 谈谈我对转基因的看法吧
已经有95人回复
- 达芬奇五年沉浮-嵌入式处理器架构之争决战2012[转]
已经有21人回复
- 【转载】结合个人经历和体会也谈谈国内博士学位以及应聘国外教职
已经有17人回复
- 【经验分享】新/语/丝文章：国内外博士学位、应聘教职、国内外学术差距
已经有23人回复
- 基金申请策略和技巧（中大）
已经有21人回复
kuaile5420
专家顾问 (著名写手)
- 应助: 72 (初中生)
- 贵宾: 0.232
- 金币: 10316.4
- 散金: 124
- 红花: 15
- 帖子: 1071
- 在线: 224.4小时
- 虫号: 1836826
- 注册: 2012-05-27
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
- 管辖: 生物医药区
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-08-09 21:27:52
wuyundang: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2014-08-12 22:07:18
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-08-09 21:27:52
wuyundang: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2014-08-12 22:07:18
| 您好，个人感觉您设计的第二个敲除菌意义不大，感觉重新梳理一下实验思路会好一些。首先我们要明确的是氧气是直接作用在启动子上还是通过相关途径产生某种物质来与启动子结合进行基因调控？这个貌似没有相关文献记载氧气可以直接作用在启动子上，因此是通过相关途径产生某种物质来进行基因调控的。因此要确定的是氧气作用后产生了那个物质。希望这样回答会对您的实验设计有所帮助。期待进一步交流。 |
2楼2014-08-08 17:48:16
3楼2014-08-09 09:31:00
kuaile5420
专家顾问 (著名写手)
- 应助: 72 (初中生)
- 贵宾: 0.232
- 金币: 10316.4
- 散金: 124
- 红花: 15
- 帖子: 1071
- 在线: 224.4小时
- 虫号: 1836826
- 注册: 2012-05-27
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
- 管辖: 生物医药区
★ ★ ★ ★ ★
wuyundang(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-10 10:27:05
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-20 09:50:19
wuyundang(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-10 10:27:05
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-20 09:50:19
|
第一个敲出菌是有意义的啊，可以通过该显色基因的表达来确定是否氧气对该启动子进行了调控。不知道你用的是那个菌，这里有篇文章，希望对您有帮助。http://wenku.baidu.com/view/1166b559c850ad02de8041df.html 里面提到了氧化应激反应对.http://wenku.baidu.com/view/d1d322d59b89680203d82579.html ,这个Ppt中也说到了氧化应激反应对基因影响效应。你可以查一下相关的文献确定氧气对启动子调控机理，然后进行设计实验。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
wuyundang4楼2014-08-10 10:18:27
5楼2014-08-11 09:47:47
kuaile5420
专家顾问 (著名写手)
- 应助: 72 (初中生)
- 贵宾: 0.232
- 金币: 10316.4
- 散金: 124
- 红花: 15
- 帖子: 1071
- 在线: 224.4小时
- 虫号: 1836826
- 注册: 2012-05-27
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
- 管辖: 生物医药区
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-20 09:50:54
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-20 09:50:54
|
您好为什么要导入其他新的菌？新的菌不是该种菌株吧？有些启动子可以在新的菌株中使用，但有些也许根本不能使用呀。给你提供几个方案，你可以参考一下。我们的目的在于检测有无氧气作用是该启动子对相关基因的调控。方案一，我们可以在该菌中该启动子所调控的基因中加入显色基因（利用限制性内切酶酶切然后连接起来），这样就没有改变菌种，可以在有氧和无氧条件下看该基因是否表达显色蛋白来，从而确定有无氧气作用是该启动子对相关基因的调控。方案二，假如我们知道该启动子控制的基因，我们可以利用定量pcr来检测有无氧气是该基因的表达情况的变化。 |
6楼2014-08-11 11:23:58
7楼2014-08-12 22:10:27
kuaile5420
专家顾问 (著名写手)
- 应助: 72 (初中生)
- 贵宾: 0.232
- 金币: 10316.4
- 散金: 124
- 红花: 15
- 帖子: 1071
- 在线: 224.4小时
- 虫号: 1836826
- 注册: 2012-05-27
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
- 管辖: 生物医药区
8楼2014-08-19 21:38:58
40