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胡琴HuQin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by dongmings at 2014-08-06 20:37:28
一般PCR失败有几个原因,引物与模板结合不好,酶结合的不好,酶活力不好。你可以试试其他的酶,如果还不行,改成更长的引物

嗯,我优化了温度、模版浓度,换了两种酶。甚至连电泳胶的浓度优化了,就是没一点点条带!这是我重新设计合成的第二对引物了,还是没有跑出条带,所以很想弄明白问题在哪里!
11楼2014-08-06 21:31:57
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胡琴HuQin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by happydove at 2014-08-06 15:21:47
你把序列给我,我帮你设计一对看看?
模板没问题,PCR体系也没问题,最有可能的是引物啦
合对引物没多少钱,别纠结了

因为我要在扩出的目的片段上设计探针,所以设计引物的时候需要考虑的问题要相对多一点点。这是我重新设计的第二对引物了!
12楼2014-08-06 21:53:04
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谈笑之夜

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
胡琴HuQin: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-08-07 20:55:24
内容已删除
一天又一天
13楼2014-08-07 12:15:11
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胡琴HuQin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by happydove at 2014-08-06 15:21:47
你把序列给我,我帮你设计一对看看?
模板没问题,PCR体系也没问题,最有可能的是引物啦
合对引物没多少钱,别纠结了

亲,你邮箱多少呢?
14楼2014-08-07 14:21:42
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happydove

新虫 (小有名气)

15楼2014-08-07 15:00:02
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a50044758

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
胡琴HuQin: 金币+2, 有帮助 2014-08-07 20:56:18
目的片段是多少?目的片段是不是有高级结构?你用什么酶扩的?你是产物特异性不高,有杂带,还是什么都扩不出来?你不说详细点没人能帮你。
16楼2014-08-07 15:01:49
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胡琴HuQin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by a50044758 at 2014-08-07 15:01:49
目的片段是多少?目的片段是不是有高级结构?你用什么酶扩的?你是产物特异性不高,有杂带,还是什么都扩不出来?你不说详细点没人能帮你。

我是做荧光定量RT-PCR方法的建立。这对引物是用来做标准品建立标准曲线的。有642bp。PCR产物跑完胶后,什么都没留下,胶跟没用过似的!要是能跑出个二聚体我可能都会高兴一下!~
17楼2014-08-07 16:59:55
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胡琴HuQin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by happydove at 2014-08-07 15:00:02
happydove_2008@126.com

不知道为什么邮件无法邮递~
18楼2014-08-07 17:30:44
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a50044758

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by 胡琴HuQin at 2014-08-07 16:59:55
我是做荧光定量RT-PCR方法的建立。这对引物是用来做标准品建立标准曲线的。有642bp。PCR产物跑完胶后,什么都没留下,胶跟没用过似的!要是能跑出个二聚体我可能都会高兴一下!~...

你用Taq酶扩的吗?如果Taq酶都扩不出来,而且优化体系也没有效果,可能是你的模板质量有问题。
19楼2014-08-07 19:52:04
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胡琴HuQin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by a50044758 at 2014-08-07 19:52:04
你用Taq酶扩的吗?如果Taq酶都扩不出来,而且优化体系也没有效果,可能是你的模板质量有问题。...

不知道是不是恰好模版基因发生了突变~要真是这样的话,只能说自己运气“太好”了!我还是重新设计一对引物再试试吧~
20楼2014-08-07 20:52:36
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