应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » ChIP菜鸟，请问大神们阴性抗体Ig G（兔和鼠）怎么选，你们都是哪家公司的？
71/1返回列表
查看: 2486  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zmlustc

铁虫 (初入文坛)

[求助] ChIP菜鸟，请问大神们阴性抗体Ig G（兔和鼠）怎么选，你们都是哪家公司的？ 已有1人参与

本实验室的santa的Ig G浓度低，而且试过背景有点高。求指点推荐你们觉得使用效果不错的适合做ChIP鼠和兔的Ig G呀！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-08-04 10:30:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-08-04 14:14:51
IgG control的选择取决于你所用于ChIP抗体的来源，如ChIP时用的兔（多抗）则只能选用normal rabbit IgG做对照，而且用量要一样。Santa Cruz的各种属normal IgG我都用过，应该可用。另外，你的背景有点高是什么含义？是PCR产物吗？若如此，一般不是抗体的问题，更可能是sonication的问题。
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-04 11:15:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zmlustc

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-04 11:15:38
IgG control的选择取决于你所用于ChIP抗体的来源，如ChIP时用的兔（多抗）则只能选用normal rabbit IgG做对照，而且用量要一样。Santa Cruz的各种属normal IgG我都用过，应该可用。另外，你的背景有点高是什么含义？ ...

确实是荧光定量PCR的产物很高，如你所说可能是sonication的问题，但是我每次超声的片段跑DNA胶确实是500bp左右，挺合适的呀！
赞一下 回复此楼
3楼2014-08-04 19:01:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by zmlustc at 2014-08-04 06:01:45
确实是荧光定量PCR的产物很高，如你所说可能是sonication的问题，但是我每次超声的片段跑DNA胶确实是500bp左右，挺合适的呀！...

可尝试：
1）IP的时候洗的彻底一些、抗体及细胞裂解液用量少些。
2）先用normal IgG pre-clear一下，然后再按正常步骤进行IP。

其实：
如果IgG control和目的蛋白的抗体间IP后PCR有明显差异，则问题不大，只要调整PCR循环数就可以降低IgG control的水平。另外如果这个差别存在，也可以用QPCR进行定量。
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-04 21:06:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zmlustc

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-04 21:06:28
可尝试：
1）IP的时候洗的彻底一些、抗体及细胞裂解液用量少些。
2）先用normal IgG pre-clear一下，然后再按正常步骤进行IP。

其实：
如果IgG control和目的蛋白的抗体间IP后PCR有明显差异，则问题不大，只 ...

我做的就是QPCR，Ig G control和目的蛋白抗体间没有明显差别，反而还略高，倒是阳性抗体很高，比他们俩高很多。
赞一下 回复此楼
5楼2014-08-05 09:05:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝墨小妹

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zmlustc at 2014-08-05 09:05:05
我做的就是QPCR，Ig G control和目的蛋白抗体间没有明显差别，反而还略高，倒是阳性抗体很高，比他们俩高很多。...

你好，你的chip做的就是QPCR，Ig G control和目的蛋白抗体间没有明显差别，反而还略高，的问题解决了吗？我也遇到了，想不明白，求大神指点！
赞一下 回复此楼
6楼2015-10-29 15:29:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝墨小妹

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zmlustc at 2014-08-04 19:01:45
确实是荧光定量PCR的产物很高，如你所说可能是sonication的问题，但是我每次超声的片段跑DNA胶确实是500bp左右，挺合适的呀！...

你好，打扰一下，你的这个问题确实是荧光定量PCR的产物很高，如你所说可能是sonication的问题，但是我每次超声的片段跑DNA胶确实是500bp左右，挺合适的呀我也遇到同样的问题，求大神指点。
赞一下 回复此楼
7楼2015-10-29 15:31:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zmlustc 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭