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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » ChIP菜鸟，请问大神们阴性抗体Ig G（兔和鼠）怎么选，你们都是哪家公司的？
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zmlustc

铁虫 (初入文坛)

[求助] ChIP菜鸟，请问大神们阴性抗体Ig G（兔和鼠）怎么选，你们都是哪家公司的？ 已有1人参与

本实验室的santa的Ig G浓度低，而且试过背景有点高。求指点推荐你们觉得使用效果不错的适合做ChIP鼠和兔的Ig G呀！
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1楼 2014-08-04 10:30:27
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by zmlustc at 2014-08-04 06:01:45
确实是荧光定量PCR的产物很高，如你所说可能是sonication的问题，但是我每次超声的片段跑DNA胶确实是500bp左右，挺合适的呀！...

可尝试：
1）IP的时候洗的彻底一些、抗体及细胞裂解液用量少些。
2）先用normal IgG pre-clear一下，然后再按正常步骤进行IP。

其实：
如果IgG control和目的蛋白的抗体间IP后PCR有明显差异，则问题不大，只要调整PCR循环数就可以降低IgG control的水平。另外如果这个差别存在，也可以用QPCR进行定量。
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4楼2014-08-04 21:06:28
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-08-04 14:14:51
IgG control的选择取决于你所用于ChIP抗体的来源，如ChIP时用的兔（多抗）则只能选用normal rabbit IgG做对照，而且用量要一样。Santa Cruz的各种属normal IgG我都用过，应该可用。另外，你的背景有点高是什么含义？是PCR产物吗？若如此，一般不是抗体的问题，更可能是sonication的问题。
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2楼2014-08-04 11:15:38
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zmlustc

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-04 11:15:38
IgG control的选择取决于你所用于ChIP抗体的来源，如ChIP时用的兔（多抗）则只能选用normal rabbit IgG做对照，而且用量要一样。Santa Cruz的各种属normal IgG我都用过，应该可用。另外，你的背景有点高是什么含义？ ...

确实是荧光定量PCR的产物很高，如你所说可能是sonication的问题，但是我每次超声的片段跑DNA胶确实是500bp左右，挺合适的呀！
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3楼2014-08-04 19:01:45
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zmlustc

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-04 21:06:28
可尝试：
1）IP的时候洗的彻底一些、抗体及细胞裂解液用量少些。
2）先用normal IgG pre-clear一下，然后再按正常步骤进行IP。

其实：
如果IgG control和目的蛋白的抗体间IP后PCR有明显差异，则问题不大，只 ...

我做的就是QPCR，Ig G control和目的蛋白抗体间没有明显差别，反而还略高，倒是阳性抗体很高，比他们俩高很多。
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5楼2014-08-05 09:05:05
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