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求助真菌细菌显微镜观察常用染色剂 已有1人参与
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| 除了常用的革兰氏染色法，还有哪些染色剂可以观察细菌、真菌的？（尤其是真菌的染色剂） |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
ccrr110111: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-11 20:09:32
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ccrr110111: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-11 20:09:32
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希望对你有帮助！ （一）高碘酸-无色品红（PAS）法 1．试剂配制 （1）0.5%高碘酸水溶液： 高碘酸0.5g 蒸馏水100ml 溶解后，用小口砂塞瓶盛装， 置于4℃冰箱保存。使用前取出恢复至室温。 （2）0.5%偏重亚硫酸钠液： 偏重亚硫酸钠0.5g 蒸馏水100ml 溶解后，用小口砂塞瓶盛装， 置于4℃冰箱保存。使用前取出恢复至室温。 （3）无色品红液（Schiff试剂）： 碱性品红1g 蒸馏水200ml 1N盐酸20ml 偏重亚硫酸钠1~1.5g 活性炭1~1.5g 取一只500ml的洁净三角烧瓶盛蒸馏水200ml并煮沸，将碱性品红加入煮沸的蒸馏水中，摇动数分钟使碱性品红完全溶解（此时溶液为深红色）；待溶液冷却至50℃时，过滤至另一只洁净三角烧瓶内，加入1N盐酸20ml；待溶液冷却至25℃左右时，再加入偏重亚硫酸钠，随即用胶塞塞紧瓶口，并轻轻摇动使其溶解，此时碱性品红液的颜色明显变淡。将溶液置于室温、暗处24h，此时溶液应呈淡稻草黄色或淡红色。加入活性炭粉，搅匀后，塞瓶口轻摇1~2min，静置1~2h；然后，将溶液通过双层滤纸过滤到小口砂塞瓶内，此时溶液应完全无色，即为无色品红，又称Schiff液，置于4℃冰箱内保存。 （4）亮绿水溶液： 亮绿0.2g 蒸馏水99.8ml 冰醋酸0.2ml 2．染色程序 （1）组织块固定于4%中性甲醛液中，常规脱水、石蜡包埋和切片。 （2）切片脱蜡至水。 （3）0.5%高碘酸氧化5~8min。 （4）流水冲洗2min，再用蒸馏水洗。 （5）入无色品红液，于暗处并加盖作用10~20min。 （6）0.5%偏重亚硫酸钠液滴洗2次，每次约1min。 （7）流水冲洗5min。 （8）亮绿水溶液复染数秒。 （9）稍水洗。 （10）常规脱水、透明，中性树胶封固。 3．染色结果 真菌呈品红色，组织呈绿色。 （二）六胺银法 1．试剂配制 （1）8%铬酸水溶液： 铬酸8g 蒸馏水100ml （2）0.5%偏重亚硫酸钠液： 偏重亚硫酸钠0.5g 蒸馏水100ml （3）5%硝酸银溶液： 硝酸银250mg 蒸馏水5ml （4）3%六次甲基四胺水溶液： 六次甲基四胺3g 蒸馏水100ml （5）5%四硼酸钠液： 四硼酸钠5g 蒸馏水100ml （6）六胺银贮备液： 5%硝酸银水溶液5ml 3%六次甲基四胺水溶液100ml 将3%六次甲基四胺水溶液加入5%硝酸银溶液中，随即形成白色沉淀；此沉淀在摇动中立即溶解。取澄清液置于4℃冰箱内保存，可在数月内使用。 （7）六胺银工作液： 六胺银贮备液10ml 蒸馏水25ml 5%四硼酸钠液2ml 将5%四硼酸钠液加入蒸馏水中，然后加入六胺银贮备液，搅拌混合后即可使用。 （8）1%氯化金水溶液： 氯化金1g 蒸馏水100ml 先配制上述1%氯化金液贮存，另用蒸馏水与原液按9∶1稀释成0.1%氯化金液。 （9）2%硫代硫酸钠液： 硫代硫酸钠2g 蒸馏水100ml （10）亮绿水溶液： 亮绿0.2g 蒸馏水100ml 冰醋酸0.2ml （11）橙黄G染液： 橙黄G2g 蒸馏水100ml 磷钨酸5g 2．染色程序 （1）组织块固定于4%中性甲醛液中，常规脱水、石蜡包埋和切片。 （2）切片脱蜡至水。 （3）8%铬酸水溶液氧化20min。 （4）自来水稍洗。 （5）5%偏重亚硫酸钠液处理1min。 （6）流水冲洗5min，再用蒸馏水洗2次。 （7）置入六胺银工作液于温箱内（58~60℃）60~90min，至切片呈黄褐色，即在显微镜下观察，见真菌呈黑褐色为止。 （8）蒸馏水洗。 （9）滴入0.1%氯化金溶液调色2~3min。 （10）流水稍洗。 （11）2%硫代硫酸钠液处理2~5min。 （12）流水冲洗5min。 （13）用亮绿液复染20~40s，或用橙黄G复染1~2s。 （14）快速水洗。 （15）95%乙醇和无水乙醇脱水。 （16）二甲苯透明，中性树胶封固。 3．染色结果 各种真菌均被着色。菌丝和孢子呈明显的黑褐色，抗酸杆菌也呈黑褐色。背景为淡绿色（用亮绿复染时）或橙黄色（用橙黄G复染时）或红色（用伊红复染时）。 （三）爱先蓝（alcian blue）法 1．试剂配制 （1）爱先蓝水溶液（pH2.5）： 爱先蓝1g 蒸馏水97ml 冰醋酸3ml 麝香草酚50mg （2）核固红液：参见网状纤维染色“（一）氢氧化银氨液浸染法（Ⅰ）”。 2．染色程序 （1）组织固定于4%中性甲醛液中，常规脱水、石蜡包埋和切片。 （2）切片脱蜡至水。 （3）爱先蓝染液染10~20min。 （4）稍水洗。 （5）核固红液复染5~10min。 （6）稍水洗。 （7）常规脱水、透明，中性树胶封固。 3．染色结果 新型隐球菌的荚膜呈蓝色，胞核呈红色。 |
2楼2014-08-04 22:32:02
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3楼2014-08-11 20:09:39
