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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 电泳结果如此让人泪奔，下一步该如何做呢？
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
梦飘雪(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-04 19:36:12
大哥 把你抽的基因组跑电泳的图拿出来晒晒 用基因组为模板扩增目的基因 最重要的是抽提的基因组的质量 最理想的是抽出的基因组跟质粒差不多 一条明亮的主带
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11楼2014-08-04 16:02:33
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

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梦飘雪(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-04 19:36:24
梦飘雪: 金币+44, ★★★很有帮助, 谢谢你哦 2014-10-30 09:57:13
我之前做的时候有时候也会出现这种现象，镁离子和dNTP的浓度都稍微降一下，因为dNTP浓度高的话容易出问题。引物10uM浓度，20uL体系一般各需要0.5uL就可以了，多了反而不好。提取出RNA后可以先跑一下电泳，看看是不是有三条条带，也有可能是提取步骤出问题了。退火温度可以改变一下，因为下面有的引物二聚体有点多……
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
12楼2014-08-04 16:56:30
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

确定引物没有问题吗？用其他引物试下看你提的基因组是否能成功扩增。
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13楼2014-08-05 15:43:25
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a50044758

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

提高退火温度，把Mg离子的浓度降低点，或者直接用含有Mg离子的Buffer，加终浓度2%左右的DMSO再试着P一次。
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14楼2014-08-05 15:51:14
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wangmaaini

新虫 (正式写手)
退火温度，模板的量2.3.5微升的都试试主要两个。

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15楼2017-10-21 01:27:33
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wangmaaini

新虫 (正式写手)
我们直接用的Ex Taq酶省事很多

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16楼2017-10-21 01:28:13
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