应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 电泳结果如此让人泪奔，下一步该如何做呢？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
52/1返回列表
查看: 1869  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

梦飘雪

新虫 (小有名气)

[求助] 电泳结果如此让人泪奔，下一步该如何做呢？ 已有7人参与

这是做的浓度梯度，me2+浓度梯度，还有引物浓度梯度，，结果还是如此，下一步怎么让人做下去啊

电泳结果如此让人泪奔，下一步该如何做呢？
jh 2014-08-01 15 小时 49 分钟.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
Justgo!
1楼 2014-08-01 15:58:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangmaaini

新虫 (正式写手)
我们直接用的Ex Taq酶省事很多

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
16楼2017-10-21 01:28:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
说下条件呗，扩增的是基因组，还是质粒，片段多大，用的什么酶，体系，反应条件，要不爱莫能助阿
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-01 16:42:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦飘雪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ksws0465326 at 2014-08-01 16:42:32
说下条件呗，扩增的是基因组，还是质粒，片段多大，用的什么酶，体系，反应条件，要不爱莫能助阿

谢谢你啊,我扩增的是基因组,片段是366-440bp的片段，用的是rTaq酶。体系是40ul ，
10xbuffer 4ul
Mg2+  4ul ( 25mM)
dNTPs 4ul (10mM)
Taq 0.5ul
template DNA 1.0ul(about 50ng)
primer F 1.60ul
primer R 1.60ul
dd H2O 补足至40ul
pcr 反应条件 退火温度是55摄氏度，延伸时间是1min
赞一下 回复此楼
Justgo!
3楼2014-08-01 17:14:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-08-01 23:56:41
梦飘雪: 金币+30, ★有帮助, 亲，虽效果不好。但还是要谢谢你呢！ 2014-08-04 15:31:01
引用回帖:
3楼: Originally posted by 梦飘雪 at 2014-08-01 17:14:45
谢谢你啊,我扩增的是基因组,片段是366-440bp的片段，用的是rTaq酶。体系是40ul ，
10xbuffer 4ul
Mg2+  4ul ( 25mM)
dNTPs 4ul (10mM)
Taq 0.5ul
template DNA 1.0ul(about 50ng)
primer F 1.60ul
primer R ...

看体系，没啥大毛病，dNTP稍微有点儿高，4微终浓度1mM，一般终浓度0.2mM 左右。可以试着降低一点儿加1微左右试试，因为dNTP浓度太高PCR也会出不来，mg2+的话 根据TOYOBO的建议终浓度在1.5mM，可以先做下dNTP降低浓度的，然后再试试降低mg，primer 差不多，就这样，还有就是反应条件了，退火温度也可以做梯度，50-60，以前我做乙肝病毒DNA时做过这个范围，再有循环数，30，35，40，或更高，都可以尝试。或者，你可以看看你们实验室其他人有没有已经扩增出来的基因组，借过来用你的反应条件看看能不能扩出来，对比下，如果出来了，就是你基因组问题，如果没出来，看看两者反应体系条件的区别再做调整。祝早日成功！
赞一下(2人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

梦飘雪
4楼2014-08-01 20:06:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 327求调剂 +5 小卡不卡. 2026-03-29 5/250 2026-03-30 19:30 by Wang200018
[考研] 322求调剂 +10 宋明欣 2026-03-27 10/500 2026-03-30 18:47 by 544594351
[考研] 08工科，295，接受跨专业调剂 +3 lmnlzy 2026-03-30 3/150 2026-03-30 17:49 by wangjy2002
[考研] 0703 化学 求调剂，一志愿山东大学 342 分 +7 Shern—- 2026-03-28 7/350 2026-03-30 16:31 by nothing投稿中
[考研] 329求调剂 +8 星野? 2026-03-26 8/400 2026-03-30 13:41 by chemdavid
[硕博家园] 求调剂 有机化学考研356分 +10 Nadiums 2026-03-25 11/550 2026-03-30 11:56 by yjolah
[考研] 348求调剂 +6 小懒虫不懒了 2026-03-28 6/300 2026-03-30 10:29 by Evan_Liu
[考研] 311求调剂 +10 lin0039 2026-03-26 10/500 2026-03-30 10:26 by herarysara
[考研] 337求调剂 +6 《树》 2026-03-29 6/300 2026-03-30 10:15 by herarysara
[考研] 332求92调剂 +8 蕉蕉123 2026-03-28 8/400 2026-03-29 10:46 by 周梓丹
[考研] 298求调剂 +4 种圣赐 2026-03-28 4/200 2026-03-29 08:42 by q1092522407
[考研] 321求调剂 +7 璞玉~~ 2026-03-25 8/400 2026-03-29 06:41 by 544594351
[考研] 085602 化工专硕 338分 求调剂 +12 路痴小琪 2026-03-27 12/600 2026-03-28 15:41 by L135790
[考研] 材料277求调剂 +7 min3 2026-03-24 7/350 2026-03-28 11:39 by xuxiang
[考研] 315分求调剂 +7 26考研上岸版26 2026-03-26 7/350 2026-03-28 04:05 by fmesaito
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 298调剂 +3 jiyingjie123 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:57 by wxiongid
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 机械学硕总分317求调剂！！！！ +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭