| 查看: 1734 | 回复: 15 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
[求助]
电泳结果如此让人泪奔，下一步该如何做呢？已有7人参与
|
|||||
这是做的浓度梯度，me2+浓度梯度，还有引物浓度梯度，，结果还是如此，下一步怎么让人做下去啊 jh 2014-08-01 15 小时 49 分钟.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有86人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
wangranjun
荣誉版主 (知名作家)
广庭之惘然
-
专家经验: +106 - 应助: 108 (高中生)
- 贵宾: 2.351
- 金币: 33457.9
- 散金: 3850
- 红花: 153
- 沙发: 8
- 帖子: 5316
- 在线: 1310.2小时
- 虫号: 2234819
- 注册: 2013-01-11
- 性别: GG
- 专业: 药物毒理
- 管辖: 文学芳草园
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
梦飘雪(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-04 19:36:24
梦飘雪: 金币+44, ★★★很有帮助, 谢谢你哦 2014-10-30 09:57:13
梦飘雪(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-04 19:36:24
梦飘雪: 金币+44, ★★★很有帮助, 谢谢你哦 2014-10-30 09:57:13
| 我之前做的时候有时候也会出现这种现象，镁离子和dNTP的浓度都稍微降一下，因为dNTP浓度高的话容易出问题。引物10uM浓度，20uL体系一般各需要0.5uL就可以了，多了反而不好。提取出RNA后可以先跑一下电泳，看看是不是有三条条带，也有可能是提取步骤出问题了。退火温度可以改变一下，因为下面有的引物二聚体有点多…… |
12楼2014-08-04 16:56:30
ksws0465326
金虫 (小有名气)
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 885.4
- 红花: 6
- 帖子: 124
- 在线: 74.5小时
- 虫号: 3263751
- 注册: 2014-06-09
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2014-08-01 16:42:32
3楼2014-08-01 17:14:45
ksws0465326
金虫 (小有名气)
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 885.4
- 红花: 6
- 帖子: 124
- 在线: 74.5小时
- 虫号: 3263751
- 注册: 2014-06-09
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-08-01 23:56:41
梦飘雪: 金币+30, ★有帮助, 亲，虽效果不好。但还是要谢谢你呢！ 2014-08-04 15:31:01
gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-08-01 23:56:41
梦飘雪: 金币+30, ★有帮助, 亲，虽效果不好。但还是要谢谢你呢！ 2014-08-04 15:31:01
|
看体系，没啥大毛病，dNTP稍微有点儿高，4微终浓度1mM，一般终浓度0.2mM 左右。可以试着降低一点儿加1微左右试试，因为dNTP浓度太高PCR也会出不来，mg2+的话 根据TOYOBO的建议终浓度在1.5mM，可以先做下dNTP降低浓度的，然后再试试降低mg，primer 差不多，就这样，还有就是反应条件了，退火温度也可以做梯度，50-60，以前我做乙肝病毒DNA时做过这个范围，再有循环数，30，35，40，或更高，都可以尝试。或者，你可以看看你们实验室其他人有没有已经扩增出来的基因组，借过来用你的反应条件看看能不能扩出来，对比下，如果出来了，就是你基因组问题，如果没出来，看看两者反应体系条件的区别再做调整。祝早日成功！ |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
梦飘雪4楼2014-08-01 20:06:35