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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 发酵上清液和硫酸铵沉淀后细菌素的抑菌活性
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芯微蓝

金虫 (初入文坛)

[求助] 发酵上清液和硫酸铵沉淀后细菌素的抑菌活性 已有2人参与

将发酵液离心后得到的上清液进行抑菌实验，并没有产生抑菌圈。
将发酵液用硫酸铵沉淀透析前后各留了样，去做抑菌实验，却在加细菌素的部分长了菌，而且镜检显示和指示菌不是同一种菌。
是因为我没有在透析后加除菌步骤吗？还是别的什么原因？求各位大神指点，谢谢！
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1楼 2014-08-01 10:02:17
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elise1987

金虫 (著名写手)
透析过程染了别的菌？个人角得应该加个初菌过滤

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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不折腾，不胡闹，珍惜时间和生命
2楼2014-08-01 13:55:02
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bigboy2050

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dllchina: 金币+1, 鼓励应助 2014-08-01 23:43:04
芯微蓝: 金币+2, ★有帮助 2014-08-05 14:09:05
样品中有其他菌的话做抑菌试验时很容易覆盖抑菌圈，干扰检测。从你的描述看，发酵液中有效物质的含量并不高，很多细菌素或抗菌肽通过基因工程菌生产。
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职业无分贵贱，做事要有格调
3楼2014-08-01 14:22:27
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devil小斌

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
芯微蓝: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-05 14:09:15
1. 发酵液是可以抑制的么？如果可以的话，说明发酵液的有效成分水溶性的物质很少，这样的话，硫酸铵沉淀也就没多大意义了。
2. 如果要确定水溶性的有效物质，你可以将上清液经过旋转蒸发，浓缩n倍之后在试一试。有抑制作用，之后再去硫酸铵沉淀。
3. 理论上，每次做实验的发酵液都是要经过0.22 μm的过滤膜（最好是质量好的）过滤的，不然不能确定你之前培养的菌是否去除。
4. 你的沉淀物应该抑制作用很强的，你可以直接分析沉淀物啊~
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人活争口气~
4楼2014-08-03 09:45:10
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芯微蓝

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by devil小斌 at 2014-08-03 09:45:10
1. 发酵液是可以抑制的么？如果可以的话，说明发酵液的有效成分水溶性的物质很少，这样的话，硫酸铵沉淀也就没多大意义了。
2. 如果要确定水溶性的有效物质，你可以将上清液经过旋转蒸发，浓缩n倍之后在试一试。有 ...

发酵液可以抑制，所以要将发酵液中的细菌素用硫酸铵沉淀下来。将沉淀复溶透析是为了除盐。可能是因为我在硫酸铵沉淀、复溶、透析过程中染了杂菌，而该杂菌不被此种细菌素抑制所导致的。
谢谢你的帮助，我还在考虑细菌素粗提液中的细菌有没有必要除去？如果真的要除用什么方法好？我试过滤膜，很容易堵。
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5楼2014-08-05 14:08:13
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devil小斌

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 芯微蓝 at 2014-08-05 14:08:13
发酵液可以抑制，所以要将发酵液中的细菌素用硫酸铵沉淀下来。将沉淀复溶透析是为了除盐。可能是因为我在硫酸铵沉淀、复溶、透析过程中染了杂菌，而该杂菌不被此种细菌素抑制所导致的。
谢谢你的帮助，我还在考虑 ...

如果粗提液中的细菌不除掉，就不可以叫做无菌发酵液了。所以要除的。过滤膜就是的可以，本来就比较难过滤。你可以先用0.45 μm的先过一遍，之后再用0.22 μm的试一下，这样就没那么难了。
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人活争口气~
6楼2014-08-05 19:09:41
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芯微蓝

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by devil小斌 at 2014-08-05 19:09:41
如果粗提液中的细菌不除掉，就不可以叫做无菌发酵液了。所以要除的。过滤膜就是的可以，本来就比较难过滤。你可以先用0.45 μm的先过一遍，之后再用0.22 μm的试一下，这样就没那么难了。...

我昨天下午将透析液重新离心后，再用0.45μm的膜再抽滤，1min就得换次膜，太艰难了。我没过0.22μm的膜直接就上阳离子柱，不知道结果怎么样？
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7楼2014-08-06 08:35:42
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