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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » X33菌落PCR
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崔永霞

铁虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by songzuowei at 2014-07-31 14:58:30
所以我猜测可能你的电转条件不合适 你再摸索一下电转条件，转化效率低的话，你可能随机挑了几个菌去测序，这几个菌都没转进去也是有可能的，你重新电转，通过抽酵母基因组方式阳性鉴定后，若鉴定出阳性就没问题了...

谢谢，我试一下再。
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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
11楼2014-08-01 09:07:11
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崔永霞

铁虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by 圆yy at 2014-07-31 22:48:45
基因组提取了先做个pcr看看，能不能有目的基因在里面？？？如果没有或者有，在决定吧。分子实验熬得就是时间和经历

哦，我试一下再。
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12楼2014-08-01 09:08:03
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shyh1983

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 崔永霞 at 2014-08-01 09:05:48
首先，非常感谢你的回复。有几个问题还想请教一下：1：47个菌用zeocin 梯度筛选是怎么个做法？ 2：我送的是菌液，测序结果单里面说的是测序反应失败，而且我也在测序单上备注了这是毕赤酵母X33菌液。3：我是转了六 ...

zeocin 梯度筛选：可以把47个转化子用牙签挑到已加入200ulYPD液体的96孔板中（可以加入100ug/mlzeocin，也可以不加，如不加，操作注意无菌），30℃培养2-3天。在将此培养菌液稀释40倍，取1ul点在0.25、0.5、1.0、2.0mg/ml zeocin的YPD板上，培养2-3天观察转化子在各梯度上的生长情况。鉴于你的转化子较少，建议可以先点在0.5上筛，如果筛到，再在1.0上筛，如果0.5上筛不到，则在0.25上筛。最后将筛到的做PCR鉴定。不建议送酵母菌液测序，只要你的表达质粒测序鉴定是对的，酵母转化子PCR鉴定也是对的，一般都没问题。当然，如果实在想测，建议提取基因组送去测。
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崔永霞
13楼2014-08-01 10:47:11
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崔永霞

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by shyh1983 at 2014-08-01 10:47:11
zeocin 梯度筛选：可以把47个转化子用牙签挑到已加入200ulYPD液体的96孔板中（可以加入100ug/mlzeocin，也可以不加，如不加，操作注意无菌），30℃培养2-3天。在将此培养菌液稀释40倍，取1ul点在0.25、0.5、1.0、2 ...

非常感谢！
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14楼2014-08-02 09:18:01
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