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崔永霞

铁虫 (小有名气)

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4楼: Originally posted by songzuowei at 2014-07-31 14:58:30
所以我猜测可能你的电转条件不合适 你再摸索一下电转条件,转化效率低的话,你可能随机挑了几个菌去测序,这几个菌都没转进去也是有可能的,你重新电转,通过抽酵母基因组方式阳性鉴定后,若鉴定出阳性就没问题了...

谢谢,我试一下再。
每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
11楼2014-08-01 09:07:11
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 圆yy at 2014-07-31 22:48:45
基因组提取了先做个pcr看看,能不能有目的基因在里面???如果没有或者有,在决定吧。分子实验熬得就是时间和经历

哦,我试一下再。
每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
12楼2014-08-01 09:08:03
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shyh1983

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 崔永霞 at 2014-08-01 09:05:48
首先,非常感谢你的回复。有几个问题还想请教一下:1:47个菌用zeocin 梯度筛选是怎么个做法? 2:我送的是菌液,测序结果单里面说的是测序反应失败,而且我也在测序单上备注了这是毕赤酵母X33菌液。3:我是转了六 ...

zeocin 梯度筛选:可以把47个转化子用牙签挑到已加入200ulYPD液体的96孔板中(可以加入100ug/mlzeocin,也可以不加,如不加,操作注意无菌),30℃培养2-3天。在将此培养菌液稀释40倍,取1ul点在0.25、0.5、1.0、2.0mg/ml zeocin的YPD板上,培养2-3天观察转化子在各梯度上的生长情况。鉴于你的转化子较少,建议可以先点在0.5上筛,如果筛到,再在1.0上筛,如果0.5上筛不到,则在0.25上筛。最后将筛到的做PCR鉴定。不建议送酵母菌液测序,只要你的表达质粒测序鉴定是对的,酵母转化子PCR鉴定也是对的,一般都没问题。当然,如果实在想测,建议提取基因组送去测。

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13楼2014-08-01 10:47:11
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by shyh1983 at 2014-08-01 10:47:11
zeocin 梯度筛选:可以把47个转化子用牙签挑到已加入200ulYPD液体的96孔板中(可以加入100ug/mlzeocin,也可以不加,如不加,操作注意无菌),30℃培养2-3天。在将此培养菌液稀释40倍,取1ul点在0.25、0.5、1.0、2 ...

非常感谢!
每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
14楼2014-08-02 09:18:01
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