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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » X33菌落PCR
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] X33菌落PCR 已有4人参与

请教各位高手，我最近在做酵母X33电击转化，转化后的X33涂到带有ZEOCIN抗生素的YPD平板上时，三天后长出单菌落，我用宝生物买的lysis buffer 破壁X33释放基因组DNA，然后离心取上清液做菌落PCR, 都没有条带，总共有47个单菌落（我做了六次电击转化，涂了30个板总计），难道这47个单菌落都是假阳性吗？有没有其他可能呢，我还把单菌落挑到5ml生物YPD+Zeocin液体培养基中培养，然后把过夜培养也生长的送去测序都没测出结果，求各位高手指点。
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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
1楼 2014-07-31 09:40:48
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崔永霞

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by songzuowei at 2014-07-31 14:58:30
所以我猜测可能你的电转条件不合适 你再摸索一下电转条件，转化效率低的话，你可能随机挑了几个菌去测序，这几个菌都没转进去也是有可能的，你重新电转，通过抽酵母基因组方式阳性鉴定后，若鉴定出阳性就没问题了...

谢谢，我试一下再。
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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
11楼2014-08-01 09:07:11
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-31 13:59:54
崔永霞: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-07-31 14:00:52
酵母X33的壁比较厚，鉴定阳性不建议用你采用的方法，建议采用提取酵母基因组然后再鉴定阳性的方法，可能费时，但很可靠。另外你的电转效率可能较低，应摸索一下电转条件
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2楼2014-07-31 09:55:53
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崔永霞

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by songzuowei at 2014-07-31 09:55:53
酵母X33的壁比较厚，鉴定阳性不建议用你采用的方法，建议采用提取酵母基因组然后再鉴定阳性的方法，可能费时，但很可靠。另外你的电转效率可能较低，应摸索一下电转条件

可是我送出去测序都没结果啊
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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
3楼2014-07-31 14:00:23
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 崔永霞 at 2014-07-31 14:00:23
可是我送出去测序都没结果啊...

所以我猜测可能你的电转条件不合适 你再摸索一下电转条件，转化效率低的话，你可能随机挑了几个菌去测序，这几个菌都没转进去也是有可能的，你重新电转，通过抽酵母基因组方式阳性鉴定后，若鉴定出阳性就没问题了
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4楼2014-07-31 14:58:30
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