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崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] X33菌落PCR 已有4人参与

请教各位高手,我最近在做酵母X33电击转化,转化后的X33涂到带有ZEOCIN抗生素的YPD平板上时,三天后长出单菌落,我用宝生物买的lysis buffer 破壁X33释放基因组DNA,然后离心取上清液做菌落PCR, 都没有条带,总共有47个单菌落(我做了六次电击转化,涂了30个板总计),难道这47个单菌落都是假阳性吗?有没有其他可能呢,我还把单菌落挑到5ml生物YPD+Zeocin液体培养基中培养,然后把过夜培养也生长的送去测序都没测出结果,求各位高手指点。
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每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by songzuowei at 2014-07-31 15:00:40
还有你把单菌落送去测序,送了几个?没有结果是什么意思?至少能得到空载啊什么的结果啊 一点信号也没有的话就说明没转进去啊...

就说是测序失败
每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
10楼2014-08-01 09:06:21
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-07-31 13:59:54
崔永霞: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-07-31 14:00:52
酵母X33的壁比较厚,鉴定阳性不建议用你采用的方法,建议采用提取酵母基因组然后再鉴定阳性的方法,可能费时,但很可靠。另外你的电转效率可能较低,应摸索一下电转条件
2楼2014-07-31 09:55:53
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by songzuowei at 2014-07-31 09:55:53
酵母X33的壁比较厚,鉴定阳性不建议用你采用的方法,建议采用提取酵母基因组然后再鉴定阳性的方法,可能费时,但很可靠。另外你的电转效率可能较低,应摸索一下电转条件

可是我送出去测序都没结果啊
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3楼2014-07-31 14:00:23
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 崔永霞 at 2014-07-31 14:00:23
可是我送出去测序都没结果啊...

所以我猜测可能你的电转条件不合适 你再摸索一下电转条件,转化效率低的话,你可能随机挑了几个菌去测序,这几个菌都没转进去也是有可能的,你重新电转,通过抽酵母基因组方式阳性鉴定后,若鉴定出阳性就没问题了
4楼2014-07-31 14:58:30
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