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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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我要睡觉

新虫 (小有名气)

[求助] 原核表达 已有2人参与

请问各位大神,我是做原核表达上游也就是负责蛋白的表达,在做小试的时候 4ml LB培养基+200ul菌液,0.5mMIPTG,做两个温度,20℃,37℃。出来的结果是20℃有表达。在扩大培养的时候,按照小试的条件20℃培养,可是结果就是没有表达,试了好几次都不成功,为了防止是其表达量小,把收集的菌体试着让纯化的同事的做了下,确实木有蛋白呀!真的不知道了,求助~~~~~
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林杉

铁虫 (初入文坛)

我也做原核蛋白表达,先15度小量摇菌,到OD600值0.6时按1:100接种到250ml扩大培养,然后测3次OD值,得到倍增时间,OD值0.6时诱导,最好收菌。用细菌裂解液处理,电泳后,上清中几乎没有或者条带不清晰,是怎么回事,求助各位大神!
付出不为获得,只为值得去这样做。
8楼2014-10-14 18:34:17
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小苹果168

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有的蛋白原核表达不了,可以选择真核表达

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-07-30 21:00:22
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我要睡觉

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小苹果168 at 2014-07-30 21:00:22
有的蛋白原核表达不了,可以选择真核表达

可是小试有表达吖,到了扩大培养就就没有了
3楼2014-07-31 22:03:50
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柠萌粉

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 我要睡觉 at 2014-07-31 22:03:50
可是小试有表达吖,到了扩大培养就就没有了...

扩大培养的时候,用大点的容器去摇,再微调下摇速吧
4楼2014-08-01 10:50:03
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