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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 阴离子DEAE纯化酶，洗脱峰毛刺儿，洗脱后还有毛刺儿，希望得到中间条带的样品
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dongjiqiao

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 阴离子DEAE纯化酶，洗脱峰毛刺儿，洗脱后还有毛刺儿，希望得到中间条带的样品 已有2人参与

如图，希望得到如电泳中9号样品中的条带，但是它是在穿透峰后期出现的，在我的洗脱峰前期（31号）也是这样的样品，上样缓冲液：pH 7.0  Tris-Hcl 0.02M+Nacl 0.02M ,洗脱缓冲液pH 7.0  Tris-Hcl 0.02M+Nacl 1.0 M,梯度洗脱，请问，什么办法能够得到我想要的目的条带，另：上样缓冲液中添加一定的盐，影响不大吧，本人新手，我是问了负责仪器的老师，他说可以少加点，减少疏水作用。缓冲液没有抽滤脱气，超声10min。谢谢大神们指教！阴离子DEAE纯化酶，洗脱峰毛刺儿，洗脱后还有毛刺儿，希望得到中间条带的样品
IMG_0510.JPG
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long,longlong.
1楼 2014-07-30 10:09:47
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yuanbo934

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dongjiqiao: 金币+5 2014-08-01 09:50:44
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-08-01 10:01:38
感觉柱子里有气泡，用缓冲液多冲几次，看能不能将汽泡冲出来，还有我认为线性洗脱分离不好，用手动梯度洗脱，每次曾加5%的盐浓度。

[ 发自小木虫客户端 ]
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9楼2014-08-01 07:44:14
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dongjiqiao

铁杆木虫 (著名写手)
为什么没人来帮忙哇
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long,longlong.
2楼2014-07-30 15:29:11
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dongjiqiao: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-07-30 17:24:12
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-30 17:55:29
毛刺表示紫外灯不稳定，洗脱峰出现悬崖峭壁表示进空气。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2014-07-30 16:44:35
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dongjiqiao

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-07-30 16:44:35
毛刺表示紫外灯不稳定，洗脱峰出现悬崖峭壁表示进空气。

紫外灯不稳定可能是有什么原因呢？进空气是因为缓冲液没有抽滤，是吧？这样的话，前边洗脱出来的结果还具有可信性么？大神，看到你回复了好多这方面的帖子了，请指教哇！
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long,longlong.
4楼2014-07-30 17:23:44
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