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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 有表达活性，但量不足，不足以发现特异带，你们一般怎么处理？
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 有表达活性，但量不足，不足以发现特异带，你们一般怎么处理？ 已有4人参与

请教一下：有表达活性，但是可能量不足，不足以发现特异带，你们一般怎么处理？文章中如何解释？还是不附蛋白电泳图？还是纯化或者其他办法？
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1楼 2014-07-28 18:03:09
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by charles08 at 2014-07-29 07:32:50
准备纯化一下的，只是貌似实验好麻烦啊，看看有无别的办法，让特异蛋白带显现出来

我的测定值也很高...

其实你连上一个表达载体，带个His标签，纯化还是很简单的，有条件的情况下建议做一下，你发文章不付图片，但是你的毕业论文呢，你自己没有做好的每一部分到头都是你自己补充，并且补充起来很麻烦。 只是假设，别生气啊。 如果你的那个蛋白真的真的不是你的目的蛋白。你把后续试验都做的再完美，前面的假设也是不正确额啊。每部都好结果才好解释，才无懈可击。建议你确认以后再做后续做工作。

goodluck
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
11楼2014-07-29 14:39:18
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柠萌粉

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-07-29 10:13:28
是什么表达？原核表达吗？
把温度提高到37度 转速提高 iptg浓度提高 诱导时间增加 试试看 一般用pET的系统表达量都非常高啊
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2楼2014-07-28 19:59:55
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475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
charles08(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-07-29 10:13:32
可以纯化一下，我做个一个蛋白， 活性很高，用试剂盒可以检测，但是就是看不到特异性明显的条带。 但是有HIs纯化发现特别纯98%以上的样子，你确定有活性的话可以试试
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
3楼2014-07-28 21:07:36
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-07-29 10:13:40
最简单的方法就是把你的酶液装到透析袋里在透析袋外面撒一层PEG20000把你的酶液浓缩一下就行了。但如果是菌体破碎后的胞内蛋白不适合直接浓缩，可以用亲和纯化一下，但是如果你的蛋白太少亲和也比较费劲。
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大家相互帮助哈
4楼2014-07-28 21:49:41
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