应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » zymography（酶谱法）？
51/1返回列表
查看: 1021  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xiaohehc371

铁虫 (初入文坛)

[交流] zymography（酶谱法）？

我前两天看到两篇关于脂肪酶表达的文献，在用SDS-PAGE法检测所表达的胞外脂肪酶分子量大小时，文中还同时用zymography法检测了其大小，所用的染料为Fast Red TR Salt，具体操作步骤如下：
SDS^PAGE and zymography：
SDS^PAGE of proteins was performed in a 12% polyacrylamide
gel by the method of Laemmli . The transformants
of E. coli induced with IPTG were collected by
centrifugation, washed with 50 mM acetate bu¡er (pH
5.5), and then suspended in the sample bu¡er. The lysate
solution was subjected to SDS^PAGE. To detect esterases
including lipases, the gel was soaked at room temperature
in a solution containing 1-naphthylcaprylate instead of 1-
naphthylacetate (Sigma) and Fast Red TR Salt (Aldrich),
and the activity was visualized as a red band .
我想问一下酶谱法的原理（请详细点喔！）及具体到这个实验的原理！虫们帮帮忙啊！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

bio-rad 电转化仪及操作

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2008-04-07 20:01:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

house

银虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
除了LS说的非变性胶，也可以用变性胶来做，跑完胶后，用透析液充分洗去SDS（这个步骤称为复性），再染色。根据sds-pageMARKER的大小来区分染色的活性蛋白（Fast Red TR Salt染色）大小，MARKER用亮蓝染色。
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-04-09 15:19:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

zhengao2006

★ ★ ★
reasonspare(金币+1,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
reasonspare(金币+2,VIP+0):新虫,奖励一下
应该就是酶的特征性谱线,用sds跑出来.
赞一下(20人) 回复此楼
2楼2008-04-07 22:51:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

glucidum

金虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
zymography跑的是非变性胶电泳，不是ＳＤＳ－ＰＡＧＥ．
我了解的也不多，应该是跑native胶，然后进行活性染色，来看整个酶系中脂肪酶有几个，以及在什么位置，大约大小有多大。具体ＬＺ再查查看吧．

[ Last edited by glucidum on 2008-4-8 at 08:48 ]
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2008-04-08 08:47:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +4 西山十月 2026-08-09 6/300 2026-08-10 00:16 by liufeng0619
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +7 Lanmanbaby 2026-08-09 14/700 2026-08-09 23:33 by Tide man
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +4 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-09 22:24 by otj2008
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +15 且听虎啸 2026-08-07 22/1100 2026-08-09 22:13 by 布布和一二
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +10 布布和一二 2026-08-08 21/1050 2026-08-09 17:21 by 天神眷顾
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭