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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » zymography（酶谱法）？
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xiaohehc371

铁虫 (初入文坛)

[交流] zymography（酶谱法）？

我前两天看到两篇关于脂肪酶表达的文献，在用SDS-PAGE法检测所表达的胞外脂肪酶分子量大小时，文中还同时用zymography法检测了其大小，所用的染料为Fast Red TR Salt，具体操作步骤如下：
SDS^PAGE and zymography：
SDS^PAGE of proteins was performed in a 12% polyacrylamide
gel by the method of Laemmli . The transformants
of E. coli induced with IPTG were collected by
centrifugation, washed with 50 mM acetate bu¡er (pH
5.5), and then suspended in the sample bu¡er. The lysate
solution was subjected to SDS^PAGE. To detect esterases
including lipases, the gel was soaked at room temperature
in a solution containing 1-naphthylcaprylate instead of 1-
naphthylacetate (Sigma) and Fast Red TR Salt (Aldrich),
and the activity was visualized as a red band .
我想问一下酶谱法的原理（请详细点喔！）及具体到这个实验的原理！虫们帮帮忙啊！
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1楼 2008-04-07 20:01:57
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zhengao2006

★ ★ ★
reasonspare(金币+1,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
reasonspare(金币+2,VIP+0):新虫,奖励一下
应该就是酶的特征性谱线,用sds跑出来.
赞一下(20人) 回复此楼
2楼2008-04-07 22:51:49
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glucidum

金虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
zymography跑的是非变性胶电泳，不是ＳＤＳ－ＰＡＧＥ．
我了解的也不多，应该是跑native胶，然后进行活性染色，来看整个酶系中脂肪酶有几个，以及在什么位置，大约大小有多大。具体ＬＺ再查查看吧．

[ Last edited by glucidum on 2008-4-8 at 08:48 ]
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2008-04-08 08:47:24
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house

银虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
除了LS说的非变性胶，也可以用变性胶来做，跑完胶后，用透析液充分洗去SDS（这个步骤称为复性），再染色。根据sds-pageMARKER的大小来区分染色的活性蛋白（Fast Red TR Salt染色）大小，MARKER用亮蓝染色。
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4楼2008-04-09 15:19:14
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