24小时热门版块排行榜    

查看: 867  |  回复: 3
当前主题已经存档。

xiaohehc371

铁虫 (初入文坛)

[交流] zymography(酶谱法)?

我前两天看到两篇关于脂肪酶表达的文献,在用SDS-PAGE法检测所表达的胞外脂肪酶分子量大小时,文中还同时用zymography法检测了其大小,所用的染料为Fast Red TR Salt,具体操作步骤如下:
SDS^PAGE and zymography:
SDS^PAGE of proteins was performed in a 12% polyacrylamide
gel by the method of Laemmli . The transformants
of E. coli induced with IPTG were collected by
centrifugation, washed with 50 mM acetate bu¡er (pH
5.5), and then suspended in the sample bu¡er. The lysate
solution was subjected to SDS^PAGE. To detect esterases
including lipases, the gel was soaked at room temperature
in a solution containing 1-naphthylcaprylate instead of 1-
naphthylacetate (Sigma) and Fast Red TR Salt (Aldrich),
and the activity was visualized as a red band .
我想问一下酶谱法的原理(请详细点喔!)及具体到这个实验的原理!虫们帮帮忙啊!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

bio-rad 电转化仪及操作

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhengao2006

★ ★ ★
reasonspare(金币+1,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
reasonspare(金币+2,VIP+0):新虫,奖励一下
应该就是酶的特征性谱线,用sds跑出来.
2楼2008-04-07 22:51:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

glucidum

金虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
zymography跑的是非变性胶电泳,不是SDS-PAGE.
我了解的也不多,应该是跑native胶,然后进行活性染色,来看整个酶系中脂肪酶有几个,以及在什么位置,大约大小有多大。具体LZ再查查看吧.

[ Last edited by glucidum on 2008-4-8 at 08:48 ]
3楼2008-04-08 08:47:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

house

银虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
除了LS说的非变性胶,也可以用变性胶来做,跑完胶后,用透析液充分洗去SDS(这个步骤称为复性),再染色。根据sds-pageMARKER的大小来区分染色的活性蛋白(Fast Red TR Salt染色)大小,MARKER用亮蓝染色。
4楼2008-04-09 15:19:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaohehc371 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +11 冬十三 2026-03-15 12/600 2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考研] 271材料工程求调剂 +3 .6lL 2026-03-18 3/150 2026-03-18 14:36 by laoshidan
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +6 慕寒mio 2026-03-16 6/300 2026-03-18 14:26 by 007_lilei
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 材料,纺织,生物(0856、0710),化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 296求调剂 +5 大口吃饭 身体健 2026-03-13 5/250 2026-03-17 21:05 by 不惑可乐
[考研] 293求调剂 +6 世界首富 2026-03-11 6/300 2026-03-17 17:04 by ruiyingmiao
[考研] 211本,11408一志愿中科院277分,曾在中科院自动化所实习 +6 Losir 2026-03-12 7/350 2026-03-17 12:09 by danranxie
[基金申请] 国自科面上基金字体 +6 iwuli 2026-03-12 7/350 2026-03-16 21:18 by sculhf
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化,一志愿:哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家,不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
信息提示
请填处理意见