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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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bkli

铜虫 (小有名气)

[交流] 原核表达载体双酶切有问题

最近试验不顺利,原核表达载体PGEX用BamHⅠ和NotⅠ酶切,结果老是出现3条带,缓冲液和酶都换过了,也不知道是什么问题,不知道大家有没有遇到过这种问题,请教一下大家,给点宝贵意见,谢谢。
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ypan

木虫 (著名写手)

你的问题说明的不是很清楚!可以把你的反应体系和反应时间贴出来看看吗?
2楼2008-04-07 15:43:19
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bkli

铜虫 (小有名气)

40ul体系
DNA 16ul
K Buffer 2ul
BSA      4ul
水         16ul
酶       各1ul

反应时间从3小时到8小时都试过
3楼2008-04-07 17:29:55
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

三条带多大?
最好把电泳图贴上
4楼2008-04-07 19:44:17
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恒星年

银虫 (正式写手)

是啊,给个电泳图吧
5楼2008-04-08 12:41:37
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dawei988

铜虫 (小有名气)

载体中是否有这两个酶切位点啊?
还有就是序列中除酶切位点是否还有这其中的酶切位点啊
6楼2008-04-08 13:06:55
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bijiaoyingyang

金虫 (小有名气)

就序列中除酶切位点是否还有这其中的酶切位点?至于这个问题的可能性,我也认为有。因为质粒的多克隆位点一般比较集中与几十个碱基范围内。质粒的其他位置有的可能性不大。即使多克隆位点有2个同样的酶切位点,那酶切结果是:有1个大条带,2个小条带(甚至有个条带可能只有几或十几bp,电泳结果不明显)。
      所以,你要回头仔细看看多克隆位点是否有2个同样的酶切位点?电泳结果图传上来,我们看看。
7楼2008-04-08 13:25:50
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

你是在切空载吗?检查一下来源是否有别人的片断。
For my life!
8楼2008-04-08 14:22:19
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yellow.

引用回帖:
Originally posted by winter_gates at 2008-4-8 14:22:
你是在切空载吗?检查一下来源是否有别人的片断。

支持一下
载体哪来的
搞清载体背景很关键呀
9楼2008-04-09 09:47:48
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