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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 原核表达载体双酶切有问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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bkli

铜虫 (小有名气)

[交流] 原核表达载体双酶切有问题

最近试验不顺利，原核表达载体PGEX用BamHⅠ和NotⅠ酶切，结果老是出现3条带，缓冲液和酶都换过了，也不知道是什么问题，不知道大家有没有遇到过这种问题，请教一下大家，给点宝贵意见，谢谢。
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1楼 2008-04-07 15:40:42
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ypan

木虫 (著名写手)
你的问题说明的不是很清楚！可以把你的反应体系和反应时间贴出来看看吗？
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2楼2008-04-07 15:43:19
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bkli

铜虫 (小有名气)
40ul体系
DNA 16ul
K Buffer 2ul
BSA      4ul
水         16ul
酶       各1ul

反应时间从3小时到8小时都试过
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3楼2008-04-07 17:29:55
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
三条带多大?
最好把电泳图贴上
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4楼2008-04-07 19:44:17
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恒星年

银虫 (正式写手)
是啊，给个电泳图吧
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5楼2008-04-08 12:41:37
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dawei988

铜虫 (小有名气)
载体中是否有这两个酶切位点啊？
还有就是序列中除酶切位点是否还有这其中的酶切位点啊
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6楼2008-04-08 13:06:55
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bijiaoyingyang

金虫 (小有名气)
就序列中除酶切位点是否还有这其中的酶切位点?至于这个问题的可能性，我也认为有。因为质粒的多克隆位点一般比较集中与几十个碱基范围内。质粒的其他位置有的可能性不大。即使多克隆位点有2个同样的酶切位点，那酶切结果是：有1个大条带，2个小条带（甚至有个条带可能只有几或十几bp,电泳结果不明显）。
      所以，你要回头仔细看看多克隆位点是否有2个同样的酶切位点？电泳结果图传上来，我们看看。
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7楼2008-04-08 13:25:50
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
你是在切空载吗？检查一下来源是否有别人的片断。
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For my life！
8楼2008-04-08 14:22:19
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yellow.

引用回帖:
Originally posted by winter_gates at 2008-4-8 14:22:
你是在切空载吗？检查一下来源是否有别人的片断。

支持一下
载体哪来的
搞清载体背景很关键呀
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9楼2008-04-09 09:47:48
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