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用间苯二酚法测定蔗糖合成酶活性的疑惑 已有1人参与
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| 果糖+UDPG---->蔗糖+UDP，这是蔗糖合成酶催化的一个可逆反应。我的疑惑是：果糖和UDPG在蔗糖合成酶的催化下生成蔗糖，而间苯二酚法是通过间苯二酚和HCl将蔗糖水解成果糖和葡萄糖，使果糖和间苯二酚结合，80℃水浴后生成红色物质，测OD480吸光值，如果之前的果糖没有反应完全，那岂不是对测OD480有影响，实验结果将会不准确。 |
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luwei13566
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【答案】应助回帖
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qiaomuzhu(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-07-26 21:29:32
qiaomuzhu: 金币+7, ★★★★★最佳答案, 一直不明白NaOH的作用，非常感谢你的回复！ 2014-07-26 23:01:09
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| 你的这个酶活测定方法肯定在酶液和果糖与UDPG反应后加了一步对原始底物的处理，比如用少量强碱（NaOH之类）加热处理你的反应液，原先的果糖在加热的强碱下非常快就全分解了，然后再加酸处理你的蔗糖分解为果糖和葡萄糖，通过测定果糖和间苯二酚的颜色的吸光值来表征蔗糖的生成量。如果没有处理底物这一步的话肯定是不行的。 |
2楼2014-07-26 21:19:57
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luwei13566
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