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求知者001

荣誉版主 (知名作家)

全球通，能否？！

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[求助] 标准溶液的高效液相色谱图，两个峰区分不开怎么办？已有2人参与

7月24日下午做标准溶液（纯标样配制，混标，7种成分）高效液相出图，紫外检测器，如2014.7.24，各种物质是分开的，出峰较好，但这是第一次测试，就碰巧出现这种情况，老师也很惊讶。后来停电，中断，样品放在仪器中取不出来。

2014.7.24下午.JPG
7月25日再做，出图跟24日差别很大，出峰时间全部提前，且有总是有两种组分分不开。后来重新取过标液后再测试，情况仍无改观。具体图见2014.7.25。

2014.7.25-25.JPG

2014.7.25-20.JPG
后来调整流动相，2014.7.25对比图（从上至下）分别为如下梯度洗脱：
上：乙腈       0.01M草酸                      中：                                                 下：
0    10%          90%                            0    10%       90%                         0    10%       90%
17 30%          70%                            17    20%    80%                         17    25%    75%
20 40%          60%                            20 40%       60%                         20 40%       60%
梯度洗脱变化的只是第17min是乙腈的比例。从图上看出，乙腈为25%、30%时第4、5个峰分不开，而25%似乎比30%要好那么一点点；20%时第1、2峰和第4、5峰都分不开。当乙腈＜15%时，只有六个峰。

2014.7.25-对比.JPG
请问各位有经验的大侠，我该如何改进？急！

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人生最曼妙的风景，是内心的淡定与从容。

1楼2014-07-26 06:54:04

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求知者001

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全球通，能否？！

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引用回帖:

6楼: Originally posted by 鸦鸦 at 2014-07-29 16:52:32
首先，用固定流动相冲洗柱子，以排除因停电等原因造成柱子和管路的污染；
第二，也是最重要的，你流动相比例的切换时间不对，分不开的几种组分主要集中在10min之前，甚至8 min之前，所以你17min切换意义不大，建议 ...

还想问一下，你所说的固定流动相指的是什么？
提早切换流动相会不会因为流动相的比例增加的太快而出现基线下降的情况？如何判断什么时候切换流动相最好？