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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 环境 » 交流探讨 » 标准溶液的高效液相色谱图，两个峰区分不开怎么办？
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求知者001

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[求助] 标准溶液的高效液相色谱图，两个峰区分不开怎么办？ 已有2人参与

7月24日下午做标准溶液（纯标样配制，混标，7种成分）高效液相出图，紫外检测器，如2014.7.24，各种物质是分开的，出峰较好，但这是第一次测试，就碰巧出现这种情况，老师也很惊讶。后来停电，中断，样品放在仪器中取不出来。
标准溶液的高效液相色谱图，两个峰区分不开怎么办？
2014.7.24下午.JPG
7月25日再做，出图跟24日差别很大，出峰时间全部提前，且有总是有两种组分分不开。后来重新取过标液后再测试，情况仍无改观。具体图见2014.7.25。
标准溶液的高效液相色谱图，两个峰区分不开怎么办？-1
2014.7.25-25.JPG
标准溶液的高效液相色谱图，两个峰区分不开怎么办？-2
2014.7.25-20.JPG
后来调整流动相，2014.7.25对比图（从上至下）分别为如下梯度洗脱：
上：乙腈         0.01M草酸                       中：                                                   下：
0     10%           90%                               0     10%        90%                           0     10%        90%
17   30%           70%                              17     20%       80%                           17     25%       75%
20   40%           60%                              20   40%         60%                           20   40%         60%
梯度洗脱变化的只是第17min是乙腈的比例。从图上看出，乙腈为25%、30%时第4、5个峰分不开，而25%似乎比30%要好那么一点点；20%时第1、2峰和第4、5峰都分不开。当乙腈＜15%时，只有六个峰。
标准溶液的高效液相色谱图，两个峰区分不开怎么办？-3
2014.7.25-对比.JPG
请问各位有经验的大侠，我该如何改进？急！
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人生最曼妙的风景，是内心的淡定与从容。
1楼 2014-07-26 06:54:04
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引用回帖:
6楼: Originally posted by 鸦鸦 at 2014-07-29 16:52:32
首先，用固定流动相冲洗柱子，以排除因停电等原因造成柱子和管路的污染；
第二，也是最重要的，你流动相比例的切换时间不对，分不开的几种组分主要集中在10min之前， 甚至8 min之前，所以你17min切换意义不大，建议 ...

还想问一下，你所说的固定流动相指的是什么？
提早切换流动相会不会因为流动相的比例增加的太快而出现基线下降的情况？如何判断什么时候切换流动相最好？
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人生最曼妙的风景，是内心的淡定与从容。
8楼2014-08-03 20:47:00
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晓春儿

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
改变比例，试试能否

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阳光静好，我待如花
2楼2014-07-26 07:45:53
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引用回帖:
2楼: Originally posted by 晓春儿 at 2014-07-26 07:45:53
改变比例，试试能否

我试了很多比例，效果都不行，不知道你有没有具体的比例建议。。
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人生最曼妙的风景，是内心的淡定与从容。
3楼2014-07-26 07:50:29
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求知者001: 回帖置顶 2014-07-26 07:53:06
从对比图中似乎可以得出这样的结论，第1、2峰分开要乙腈比例大一些，而第4、5峰分开又要乙腈浓度小一些。但是出峰是是1、2先出，4、5后出。这怎么办啊？
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4楼2014-07-26 07:52:56
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