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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 原核表达的条带问题
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

[交流] 原核表达的条带问题

大家好，我最近做了个关于原核表达的实验，经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，表达出来的条带并不是单一的条带，而是弥散到整个电泳条带中，而未经诱导的大肠杆菌条带却比较专一，请问这是什么原因呢？怎么改进？或者我的条带就根本没表达出来呢？
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1楼 2008-04-06 19:55:14
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tody4617

木虫 (小有名气)

一根筋家族之独根草
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
我也在做BL21原核表达
1你说未诱导条带清晰,是足够清晰还是大概看的清楚?如果是后者,那么染色长一些,4-5小时,脱色一晚上,如果是前者,看看是不是你做胶有问题,蛋白可以从空的四周扩散出去,造成弥散.
2有一种情况,是你根本没诱导出来,我第一次做的时候,就用的别人的菌,怎么也出不来,后来人家告我说保错菌了,郁闷!
3还有种可能,你诱导的蛋白分子量太大,胶没办法分离开,进而导致一片.
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票子-房子-车子-婆子-儿子
2楼2008-04-06 20:15:33
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
我想知道诱导跟温度以及摇菌速度有没有关系．我的胶应该是没问题
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3楼2008-04-06 22:44:12
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tody4617

木虫 (小有名气)

一根筋家族之独根草
37度 210转
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票子-房子-车子-婆子-儿子
4楼2008-04-07 08:35:38
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tody4617

木虫 (小有名气)

一根筋家族之独根草
37度 210转
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票子-房子-车子-婆子-儿子
5楼2008-04-07 08:37:29
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greenspringmi

银虫 (正式写手)
第一：看转化了目的片断的表达菌株是否表达了，要依据表达载体是否需要加入诱导物质；
第二：在37度，200转左右，三个小时即可（菌株表达了目的蛋白，再从温度等因素来摸索条件，以得到可溶蛋白）
第三：电泳缓冲液要用新的（新配制，不超过2个月；新稀释的），我跑过像你说的那种胶，发现试电泳缓冲液的原因
祝你成功哦！
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6楼2008-04-07 09:07:34
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