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利用单酶切自连（小片段串联）方案 已有1人参与
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| 想表达一段基因，由于序列片段较小，想进行串联表达方案，看到有的资料说可以在目的片段的两端用同一个酶切位点，单酶切下目的片段后自连一段时间再连到同样单酶切的载体上，可以得到不同重复个数的串联表达体，有这样做过的么？切下来的片段如何进行自连？直接回收后放着就行？还是加链接酶？还有单酶切的载体不会发生自连么？怎么预防自连促进目的片段的插入？想做串联3个的方案，或谁有更好的方案？坐等回复，谢谢 |
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-07-24 22:03:48
zhenzhen0216: 金币+2, ★有帮助 2014-07-25 15:56:17
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| 我没做过单酶切自连或单酶切目的基因与载体连接的实验，但最近看到过这方面的一些东西，我想跟你分享一下。首先，单酶切会导致自连现象，从而影响目的基因与载体的重组。为了克服自连，往往是对载体的末端进行去除磷酸基，使用的是磷酸酶。因为链接是需要磷酸基的，去除磷酸基可以降低或者是避免自连。其次，无论是目的基因自连还是载体与目的基因链接都是需要DNA连接酶的参与，酶链体系包括：目的基因、载体、DNA连接酶、酶缓冲液和双蒸水（一般在16摄氏度下进行）。最后，你要注意目的基因自连时方向的问题或者构建重组载体时方向问题，避免方向错误。 |
2楼2014-07-24 17:17:12
3楼2014-07-25 15:55:48