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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒提不出来
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)

[求助] 质粒提不出来 已有4人参与

我用的pUC-T载体连接我的目的基因后转导DH5a大肠里，测序结果说明成功转导，可是挑取单菌落进行质粒提取条带特别浅，分别用4ml和7ml菌液提取的，都不行，培养时也加入了新买的氨苄，应该不会长杂菌吧，如果用锥形瓶摇菌效果会不会好点呢
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1楼 2014-07-23 14:12:24
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-24 04:14:44
有点不太明白你的测序和挑取单菌落的顺序。你用来测序的质粒不应该也是单菌落挑出来的么？如果测序时有挑过单菌落，那么直接就用测序正确的那个菌液做miniprep或midiprep就可以了。

还有就是你的生长时间够不够？ ...

我是直接用转化的大肠杆菌扩大培养后送去测序，剩下的菌液再划板的，这样做会导致质粒丢失吗？可是有人和我一样的顺序就做成功了呀。我之前都是用试管摇的，5ml 12h，可是效果不好
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6楼2014-07-24 07:30:41
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
提个质粒不需要锥形瓶吧！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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好好搞学术
2楼2014-07-23 21:30:00
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
安苄也是买的？提质粒还动用上锥形瓶了？要摇多少的节奏？

[ 发自小木虫客户端 ]
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天道酬勤
3楼2014-07-23 23:21:45
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矜天

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-07-24 22:49:14
多长时间提的？我一般是养到12到16小时之间

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2014-07-24 01:51:26
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