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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)

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[求助] 质粒提不出来已有4人参与

我用的pUC-T载体连接我的目的基因后转导DH5a大肠里，测序结果说明成功转导，可是挑取单菌落进行质粒提取条带特别浅，分别用4ml和7ml菌液提取的，都不行，培养时也加入了新买的氨苄，应该不会长杂菌吧，如果用锥形瓶摇菌效果会不会好点呢

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1楼 2014-07-23 14:12:24

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蓝色泡沫321

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引用回帖:

5楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-24 04:14:44
有点不太明白你的测序和挑取单菌落的顺序。你用来测序的质粒不应该也是单菌落挑出来的么？如果测序时有挑过单菌落，那么直接就用测序正确的那个菌液做miniprep或midiprep就可以了。

还有就是你的生长时间够不够？ ...

我是直接用转化的大肠杆菌扩大培养后送去测序，剩下的菌液再划板的，这样做会导致质粒丢失吗？可是有人和我一样的顺序就做成功了呀。我之前都是用试管摇的，5ml 12h，可是效果不好