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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)

[求助] 质粒提不出来 已有4人参与

我用的pUC-T载体连接我的目的基因后转导DH5a大肠里,测序结果说明成功转导,可是挑取单菌落进行质粒提取条带特别浅,分别用4ml和7ml菌液提取的,都不行,培养时也加入了新买的氨苄,应该不会长杂菌吧,如果用锥形瓶摇菌效果会不会好点呢
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-24 04:14:44
有点不太明白你的测序和挑取单菌落的顺序。你用来测序的质粒不应该也是单菌落挑出来的么?如果测序时有挑过单菌落,那么直接就用测序正确的那个菌液做miniprep或midiprep就可以了。

还有就是你的生长时间够不够? ...

我是直接用转化的大肠杆菌扩大培养后送去测序,剩下的菌液再划板的,这样做会导致质粒丢失吗?可是有人和我一样的顺序就做成功了呀。我之前都是用试管摇的,5ml 12h,可是效果不好
6楼2014-07-24 07:30:41
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lijianfu12

银虫 (正式写手)

提个质粒不需要锥形瓶吧!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
好好搞学术
2楼2014-07-23 21:30:00
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

安苄也是买的?提质粒还动用上锥形瓶了?要摇多少的节奏?

[ 发自小木虫客户端 ]
天道酬勤
3楼2014-07-23 23:21:45
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矜天

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-07-24 22:49:14
多长时间提的?我一般是养到12到16小时之间

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-07-24 01:51:26
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