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质粒提不出来 已有4人参与
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| 我用的pUC-T载体连接我的目的基因后转导DH5a大肠里，测序结果说明成功转导，可是挑取单菌落进行质粒提取条带特别浅，分别用4ml和7ml菌液提取的，都不行，培养时也加入了新买的氨苄，应该不会长杂菌吧，如果用锥形瓶摇菌效果会不会好点呢 |
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lijianfu12
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2楼2014-07-23 21:30:00
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4楼2014-07-24 01:51:26
【答案】应助回帖
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蓝色泡沫321(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:38:02
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蓝色泡沫321(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:38:02
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有点不太明白你的测序和挑取单菌落的顺序。你用来测序的质粒不应该也是单菌落挑出来的么？如果测序时有挑过单菌落，那么直接就用测序正确的那个菌液做miniprep或midiprep就可以了。 还有就是你的生长时间够不够？提取质粒之前菌液生长情况如何？一般5ml左右过夜做miniprep足够了。如果长得不好的话，可以先用单菌落的菌液在5ml左右摇菌8小时，再从这5ml中取1ml左右到锥形瓶过夜摇菌，100ml左右，然后做midiprep |
5楼2014-07-24 04:14:44
6楼2014-07-24 07:30:41
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9楼2014-07-24 08:54:07
鬼羽帝魂
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10楼2014-07-24 09:43:23
120