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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » RAW264.7复苏细胞不贴壁 生长缓慢是怎么回事？
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W格子

新虫 (初入文坛)

[求助] RAW264.7复苏细胞不贴壁 生长缓慢是怎么回事？ 已有9人参与

我的细胞染菌了，重新复苏了一管。结果培养了一天，只有稀稀落落的很少量的细胞贴壁了，这是细胞死了的意思吗？
我寻思可能那些未贴壁的也不会再贴壁了，就换了液（含10%FBS的DMEM培养基），继续培养了，希望贴壁的那点儿能长起来。现在已经继续培养了两天了，看着好像比第一天多了一点点，有些是一坨坨的，有些是单个零星的分布着，但是仍然非常少。各位前辈遇到过这情况吗？我这可能是什么原因导致的呢？细胞还有希望长起来？我尝试再换液含20%血清的培养基养一下行吗？
急求指导~~  非常感谢~~
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1楼 2014-07-23 12:30:57
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W格子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 一旺百旺 at 2014-07-25 10:08:59
首先看看细胞密度，包括没有贴壁的，大概知道你冻存的时候是不是细胞密度太低。如果太低状态不好也正常，细胞生长有一定的密度，要不生长很慢。到最后细胞状态可能也不会太好。复苏大约五个小时以后就要看看细胞状态 ...

好的。谢谢建议，下次做的时候特别注意一下。
因为这个细胞有时候特别不好消化，可能我上次冻存前消化的时间长了（至少3min），虽然细胞浓度挺高的但细胞状态可能已经不好了。
细胞房那个就离心机转速有点不稳定了，是不是也有影响啊？会有机械损伤？
复苏的洗两次，是要洗去DMSO吗？它的影响特别大吗？
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15楼2014-07-25 13:02:36
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那个

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
W格子: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-07-23 22:43:02
慢慢等一下吧
只要没染菌，慢慢养着吧，就别老折腾它们了。
赞一下 回复此楼
俺们中心提供各种分析测试，iso品质，有需要站内哈~~~~
2楼2014-07-23 12:44:09
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W格子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 那个 at 2014-07-23 12:44:09
慢慢等一下吧
只要没染菌，慢慢养着吧，就别老折腾它们了。

好的吧  谢谢你
就是很害怕它长不起来了
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-23 22:42:36
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
W格子: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-07-24 23:09:10
首先确定你的培养条件没有问题，培养基里改加的都加了，培养基和血清都是合格的牌子和批次
然后确定你拿来复苏的细胞没有问题
再看看你的培养条件，二氧化碳还有吗，培养箱的水槽还有水吗，培养箱温度控制对不对，等等
如果一切都没问题，那就慢慢养吧
不需要换20%的
赞一下 回复此楼
4楼2014-07-24 00:25:42
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