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charles08

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 重金求证论文中碰到的蛋白电泳模糊不清晰的问题, 已有5人参与

如图，我在夏天跑的蛋白电泳和冬天清晰度完全不一样，夏天的好模糊，一团团的，没有清晰边界。而冬天跑的非常清晰；

请各位分析下原因：
中间变化的因素：1）冬天用的是自制的试剂、缓冲液等，夏天用的是碧云天公司买的成套蛋白电泳试剂；
                2）冬天实验室温度在10-15度左右，夏天实验室温度25-35间；其他 诱导条件均不变
                3）个人操作冬天是新手，夏天熟练多了

各位帮忙找找原因，跪谢！！！！

谁能找到正确的答案及分析，另加金币

重金求证论文中碰到的蛋白电泳模糊不清晰的问题,
未标题-1.jpg
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1楼 2014-07-23 11:42:59
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuguiyan at 2014-07-23 12:02:14
我觉得是温度太高蛋白有部分降解了，加大上样量，然后电泳过程中加冰块或者在制冷的柜子里进行，总之要保持低温，至少也要4度啊，现在夏天这么热样品也要尽量放在冰盒上，不能像冬天那么拿来拿去！祝你顺利，有问题 ...

我在怀疑是否在诱导时就产生部分降解了，拿样品都采用冰盒放置的，至少现在好像

上样量似乎都是一样的
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5楼2014-07-23 14:53:14
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-23 12:47:40
模糊的原因一是样品上样量太少，你看marker其实跑的结果差不多；二可能是温度导致的，可以采用恒温电泳系统解决。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-07-23 11:50:48
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-23 12:47:58
我觉得是温度太高蛋白有部分降解了，加大上样量，然后电泳过程中加冰块或者在制冷的柜子里进行，总之要保持低温，至少也要4度啊，现在夏天这么热样品也要尽量放在冰盒上，不能像冬天那么拿来拿去！祝你顺利，有问题再联系！

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-07-23 12:02:14
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2014-07-23 11:50:48
模糊的原因一是样品上样量太少，你看marker其实跑的结果差不多；二可能是温度导致的，可以采用恒温电泳系统解决。

上样量都是12UL左右，没有变化
无乱冬天夏天，每次电泳都是放在盛满冰水的盆子里跑的，电泳内的温度应该差别不大
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4楼2014-07-23 14:51:01
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