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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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charles08

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 重金求证论文中碰到的蛋白电泳模糊不清晰的问题, 已有5人参与

如图,我在夏天跑的蛋白电泳和冬天清晰度完全不一样,夏天的好模糊,一团团的,没有清晰边界。而冬天跑的非常清晰;

请各位分析下原因:
中间变化的因素:1)冬天用的是自制的试剂、缓冲液等,夏天用的是碧云天公司买的成套蛋白电泳试剂;
                2)冬天实验室温度在10-15度左右,夏天实验室温度25-35间;其他 诱导条件均不变
                3)个人操作冬天是新手,夏天熟练多了

各位帮忙找找原因,跪谢!!!!

谁能找到正确的答案及分析,另加金币

重金求证论文中碰到的蛋白电泳模糊不清晰的问题,
未标题-1.jpg
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charles08

管理员

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引用回帖:
11楼: Originally posted by 冯宝宝2014 at 2014-07-24 09:17:00
我觉得原因有2个,一是上样量少,二是destain过程时间太久。但鉴于夏天做的胶图上连Marker都不是很清楚,而且背景色为紫色,所以是你褪色过程中没及时更换吸附纸,而只是长时间褪色,所以你可以试着缩短褪色时间,好 ...

脱色一般是换4-5次脱色液
没有用过吸附纸啊
12楼2014-07-24 14:06:14
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lxj341401

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-23 12:47:40
模糊的原因一是样品上样量太少,你看marker其实跑的结果差不多;二可能是温度导致的,可以采用恒温电泳系统解决。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2014-07-23 11:50:48
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yuguiyan

专家顾问

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-23 12:47:58
我觉得是温度太高蛋白有部分降解了,加大上样量,然后电泳过程中加冰块或者在制冷的柜子里进行,总之要保持低温,至少也要4度啊,现在夏天这么热样品也要尽量放在冰盒上,不能像冬天那么拿来拿去!祝你顺利,有问题再联系!

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-07-23 12:02:14
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charles08

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2014-07-23 11:50:48
模糊的原因一是样品上样量太少,你看marker其实跑的结果差不多;二可能是温度导致的,可以采用恒温电泳系统解决。

上样量都是12UL左右,没有变化
无乱冬天夏天,每次电泳都是放在盛满冰水的盆子里跑的,电泳内的温度应该差别不大
4楼2014-07-23 14:51:01
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