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bomeijuan

银虫 (小有名气)

[交流] 急a ,PCR不出现目的条带

细菌基因组DNA提取出来以后PCR,2%的琼脂糖电泳1个小时,基本都是很多很弱的条带,不出现亮的目的条带,怀疑是引物二聚体。目的片段是200bp左右。
但是DNA提出来后跑了电泳都能看到有条带的。
但是别人跟我用相同的试剂,相同的PCR程序,相同的引物都能扩出来。
请问大家这是什么原因,条件应该怎么优化?

[ Last edited by bomeijuan on 2008-4-9 at 14:44 ]
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bomeijuan

银虫 (小有名气)

顶起来,求大家都来帮我

我是用试剂盒提的,用TIANGEN的提了效果不好,改用AXYGEN的试剂盒提还是一样的效果,不出现明显的DNA条带,不知道怎么办?
我取的肠道食糜样品,微生物提取出来以后就保存在-—20度的,也没有反复冻融。
14楼2008-04-09 14:13:23
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辛雨237

铁杆木虫 (著名写手)

有杂带吗?
电泳时间太长了啊
春暖花开
2楼2008-04-05 17:06:44
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

可能是退火温度太低了,杂带太多,大家都有,但都不亮
3楼2008-04-05 17:13:34
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

2%的琼脂糖浓度太高了,一般0.8%
做个温度梯度和模板梯度试试
4楼2008-04-05 17:14:01
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