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bomeijuan

银虫 (小有名气)

[交流] 急a ,PCR不出现目的条带

细菌基因组DNA提取出来以后PCR,2%的琼脂糖电泳1个小时,基本都是很多很弱的条带,不出现亮的目的条带,怀疑是引物二聚体。目的片段是200bp左右。
但是DNA提出来后跑了电泳都能看到有条带的。
但是别人跟我用相同的试剂,相同的PCR程序,相同的引物都能扩出来。
请问大家这是什么原因,条件应该怎么优化?

[ Last edited by bomeijuan on 2008-4-9 at 14:44 ]
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haizhiou

你的DNA确实提的很差。我当时是用的植物叶片,也是放了几个月,提取效果也不好。新鲜的提取确实要好的多。
从你的DNA电泳图片上看,左边第二个泳道的好像还有点DNA。
不知道你做的是什么,我当时不用去除RNA,我试过去除RNA,结果DNA的量更少了,试验更是不好做。
我有些DNA提取的效果和你的差不多,我建议你用这个泳道的DNA做个浓度梯度试验,
要是再不行,那就只有从新提取了。
还有可以用你的DNA加别人的试剂跑一下PCR,看看能不能跑出来。
或者换一下仪器,让别人帮你做一下试试。
再不行,可以停一段时间再试试。
13楼2008-04-07 15:08:18
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辛雨237

铁杆木虫 (著名写手)

有杂带吗?
电泳时间太长了啊
春暖花开
2楼2008-04-05 17:06:44
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

可能是退火温度太低了,杂带太多,大家都有,但都不亮
3楼2008-04-05 17:13:34
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

2%的琼脂糖浓度太高了,一般0.8%
做个温度梯度和模板梯度试试
4楼2008-04-05 17:14:01
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