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寂寞又美好

金虫 (小有名气)

[求助] RNA电泳上样时刚加进去loading Buffer 的颜色就消失了 求大神指导 已有1人参与

各位前辈们你们好,小弟最近提RNA采用琼脂糖凝胶电泳跑图,今天加样时,将5×loading buffer 和1ulRNA样混合后加到点样孔时,刚刚加进去loading buffer的蓝色就消失了,今天总共跑了9个样品,就三四个能正常加样,我昨天刚刚做过预实验,跑的图挺好的,今天是怎么了,望有遇到过这种情况的前辈们帮我解惑一下,小弟跪谢了!今天和昨天跑的图附上了。

RNA电泳上样时刚加进去loading Buffer 的颜色就消失了  求大神指导
今天加样有问题的.jpg


RNA电泳上样时刚加进去loading Buffer 的颜色就消失了  求大神指导-1
昨天跑的.jpg
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liukun261

禁虫 (小有名气)

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3楼2014-07-21 22:50:32
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查看全部 6 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是你的胶穿孔了吧,都漏了估计
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-07-21 20:45:14
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寂寞又美好

金虫 (小有名气)

我今天又跑了几个,跑之前特意检查了胶,没有穿孔,但是还是有两个出现刚上样品,就消散的现象,并且还出现了个问题:我的1,6号点样孔的样品的OD260/280都达到了2.5左右,但是跑的图还很好,还有点2:1的关系。请问这是什么原因,是我的RNA浓度太高了吗,我提的是肌肉组织。
等待.....
4楼2014-07-23 22:40:58
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人偶骑士

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 寂寞又美好 at 2014-07-23 22:40:58
我今天又跑了几个,跑之前特意检查了胶,没有穿孔,但是还是有两个出现刚上样品,就消散的现象,并且还出现了个问题:我的1,6号点样孔的样品的OD260/280都达到了2.5左右,但是跑的图还很好,还有点2:1的关系。请问这 ...

2.5……这个杂质略多啊,RNA的OD 260/280一般1.9到2.1比较正常
道之所在,虽千万人吾往矣!
5楼2014-07-24 16:22:31
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