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lzk0207

[交流] 奖励金币!!原位杂交探针制备方面的问题!在线等

在制备RNA探针做组织原位杂交时,是否SP6启动子不益用质粒做模板扩增,再用PCR产物做体外转录??急

[ Last edited by lzk0207 on 2008-4-7 at 21:29 ]
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xiaojingzhang

金虫 (小有名气)


lzk0207(金币+1,VIP+0):问一下是否可以用质SP6引物直接扩增质粒,就是说SP6启动子是否适合用pcr产物,而不是粒单酶切,,上一个本来是加给你的,结果给了楼上,,呜呜
你可以将质粒进行单酶切,在你插入片段的下游切开,然后直接用质粒作为转录模板;也可以用质粒做模板PCR,之后切胶回收PCR产物,然后转录。如果不单酶切或者不切胶回收,则会沿着质粒不停转录下去,得到的产物大部分是质粒的转录物,目的片段量很少。
5楼2008-04-05 21:37:54
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lzk0207

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2楼2008-04-05 09:44:47
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xiaojingzhang

金虫 (小有名气)

★ ★
lzk0207(金币+1,VIP+0):xiexie
lzk0207(金币+1,VIP+0):问一下是否可以用质SP6引物直接扩增质粒,就是说SP6启动子是否适合用pcr产物,而不是粒单酶切
SP6启动子可以用质粒做模板转录,而且往往比T7启动子得到的产物量更高。
4楼2008-04-05 21:34:05
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lzk0207

问一下是否可以用SP6引物直接扩增质粒(有种说法是不能sp6不能用pcr产物作体外转录),就是说SP6启动子是否跟t7一样适合用pcr产物,而不用质粒单酶切。我已经构建了质粒但是是sp6启动子的,只有用SP6引物扩增质粒,不知道可行不??

[ Last edited by lzk0207 on 2008-4-7 at 03:12 ]
6楼2008-04-07 03:08:04
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