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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 奖励金币！！原位杂交探针制备方面的问题！在线等
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lzk0207

[交流] 奖励金币！！原位杂交探针制备方面的问题！在线等

在制备RNA探针做组织原位杂交时，是否SP6启动子不益用质粒做模板扩增，再用PCR产物做体外转录？？急

[ Last edited by lzk0207 on 2008-4-7 at 21:29 ]
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1楼 2008-04-05 09:42:57
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lzk0207

凡给出有价值的解答者都可分享金币
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2楼2008-04-05 09:44:47
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lzk0207

没人会阿难道
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3楼2008-04-05 09:53:40
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xiaojingzhang

金虫 (小有名气)
★ ★
lzk0207(金币+1,VIP+0):xiexie
lzk0207(金币+1,VIP+0):问一下是否可以用质SP6引物直接扩增质粒，就是说SP6启动子是否适合用pcr产物，而不是粒单酶切
SP6启动子可以用质粒做模板转录，而且往往比T7启动子得到的产物量更高。
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4楼2008-04-05 21:34:05
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xiaojingzhang

金虫 (小有名气)
★
lzk0207(金币+1,VIP+0):问一下是否可以用质SP6引物直接扩增质粒，就是说SP6启动子是否适合用pcr产物，而不是粒单酶切,,上一个本来是加给你的，结果给了楼上，，呜呜
你可以将质粒进行单酶切，在你插入片段的下游切开，然后直接用质粒作为转录模板；也可以用质粒做模板PCR，之后切胶回收PCR产物，然后转录。如果不单酶切或者不切胶回收，则会沿着质粒不停转录下去，得到的产物大部分是质粒的转录物，目的片段量很少。
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5楼2008-04-05 21:37:54
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lzk0207

问一下是否可以用SP6引物直接扩增质粒(有种说法是不能sp6不能用pcr产物作体外转录），就是说SP6启动子是否跟t7一样适合用pcr产物，而不用质粒单酶切。我已经构建了质粒但是是sp6启动子的，只有用SP6引物扩增质粒，不知道可行不？？

[ Last edited by lzk0207 on 2008-4-7 at 03:12 ]
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6楼2008-04-07 03:08:04
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lzk0207

主要是质粒很难达到哪个浓度
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7楼2008-04-07 03:13:28
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lzk0207

huanying 欢迎来拿金币
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8楼2008-04-07 16:32:54
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lzk0207

顶上去，大家快来领剩下的金币！
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9楼2008-04-07 21:30:16
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