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cmugaoxiaohu

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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帖子: 12
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虫号: 1236286
注册: 2011-03-17
专业: 膀胱疾病

[求助] 试剂盒提取总RNA后电泳图已有13人参与

最近用qiagen试剂盒提取了一批总RNA准备做芯片，让人郁闷的提取了几次RNA总是这样见下图，左侧是Marker ,前3个是细胞总RNA，浓度分别是140多，600多， 150多；后4个是组织RNA，浓度在300-600之间（浓度单位是ng/ul），OD值在2.0左右;胶的浓度是1%TAE，上样量1ul 6*loading buffer,5ulRNA，Marker5ul未稀释。电压100，150v都用过，是降解了吗？还是其他原因？

98532540.jpg

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1楼2014-07-21 13:03:30

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w_goodluck

铜虫 (小有名气)

应助: 9 (幼儿园)
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专业: 微生物遗传育种学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cmugaoxiaohu(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-24 08:54:57

作为一个做了半年多total rna的过来人告诉楼主降解了。而且是十分明显。很奇怪降解如此严重还能测出来260/280达到2的水平。用试剂盒做的话，冰上不冰上无所谓，我认为比较关键的一点是你用的试剂和枪头必须是RNAase-free的。高温灭菌并不能去除无所不在的RNAase，有文献报道，121℃，4个小时依然残留RNAase活性。可购买经过处理的枪头和试剂，如果没有，也可以自己用CEPC等RNA酶抑制剂进行处理。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]