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200806773

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助大神们 CDNA片段PCR扩增之后没有目的条带 全是拖带已有9人参与

图在下面 每次扩增出来都是这个样子 已知CNDA 引物是没有问题的
      现在是不是模板的量出了问题 模板用了2ul,引物各2ul,PCR mix 25ul,dd水19ul  体系是50的
      目的条带应该在1900bp左右,是不是PCR的时候模板的量太大的样子?
      筛引物的时候引物都是好的 是不是得现在调整一下退火温度》?

求助大神们 CDNA片段PCR扩增之后没有目的条带 全是拖带
CDNA PCR F1 F8 F9 F11 F12.jpg


求助大神们 CDNA片段PCR扩增之后没有目的条带 全是拖带-1
F1-F12 pcr.jpg
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杏园生物

新虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

海杏园生物科技有限公司是一家专注于生物医药领域科研技术服务和个性诊断产品研发的公司。公司由中科院分子生物学专家团队带领,在上海市嘉定区科委的大力支持下率先以GMP/GLP标准建设分子检测实验室。公司秉承“促进科研进展,服务人类健康”的宗旨,依托高通量测序和生物芯片平台为促进医学研究和临床转化提供技术支撑。现阶段,杏园生物的服务内容覆盖生物标志物筛选、药物研发和个性诊断产品开发,目前已经成功为多家科研院所、知名药企提供技术服务。
1. DNA水平:杏园采用高通量测序、基因突变PCR芯片和sanger测序技术平台可以一次性检测人的全外显子组的基因突变或者插入缺失情况,也可以一次性检测几十个基因或者位点的突变、插入、缺失及拷贝数变化情况;
2. RNA水平:杏园采用基因表达PCR芯片、转录组测序技术平台,可以一次性检测人的全转录组水平基因表达、融合、突变情况,也可以通过Real Time PCR一次性检测几个、几十甚至几百个基因的表达情况;
3. 蛋白质水平:杏园采用抗体芯片技术,可以一次性检测几十甚至几百个蛋白的表达。也可以通过WB或者ELISA检测单个蛋白的表达水平。
4. 生物信息学分析:生物芯片和高通量测序数据的深入挖掘。
我的邮箱xyyinjuan@outlook.com
12楼2015-06-17 09:50:39
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-16 13:02:31
非特异性很强的样子,升升退火温度试试,可以拉梯度,或者温度梯度PCR
我会绕一个圈,走回到实验室
2楼2014-07-16 12:48:39
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怎么都行

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.9kb的产物长度,你每个循环延伸那步骤至少应该2min,不知道是不是这么做的?
3楼2014-07-16 13:09:14
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董庄青年

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人感觉   应适量加大引物与模板的量
4楼2014-07-16 13:56:10
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