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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎样提高T-vector的转化效率阿？
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shielie

铁虫 (初入文坛)

[交流] 怎样提高T-vector的转化效率阿？

各位大虾：小妹想请教一个问题，我做的PCR产物想插入到T-vector(promega公司的）上去，产物长度1900bp,初步筛选用蓝白斑和青霉素抗性，挑选白斑作PCR电泳检测，所选的PCR引物是载体上自带的M13,但是不知道为什么，选的白斑都是假阳性，pcr检测后产物的长度都是300bp，不知道是什么原因
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1楼 2008-03-31 20:28:28
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lliu

新虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
It was the problem of ligation insteal of transformation.


哈哈哈,是 instead of 吧

[ Last edited by reasonspare on 2008-4-4 at 03:55 ]
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2楼2008-04-01 03:23:46
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碧荷叶

铜虫 (初入文坛)
我也有同样的问题，有时连不上
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3楼2008-04-01 07:41:05
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shielie

铁虫 (初入文坛)

谢谢回复

谢谢各位,我决定将产物和载体的量比例提到到1:10
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4楼2008-04-01 09:39:15
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shielie

铁虫 (初入文坛)

谢谢回复

谢谢各位,我决定将产物和载体的量比例提到到1:10
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5楼2008-04-01 09:42:41
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
引用回帖:
Originally posted by shielie at 2008-4-1 09:42:
谢谢各位,我决定将产物和载体的量比例提到到1:10

产物 : 载体=1:10  ???
这样空载岂不是更多了 ？？？
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
6楼2008-04-02 12:55:42
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
挑选转化子,看质粒大小最直观,与空载体对照.
pcr检测后产物的长度都是300bp.一个很可能得原因是你的PCR产物不纯，或者产物被不完全降解。
原则上说好的T载体不该有蓝斑出现或者数量很少，因为末端突出的T不可能连接环化的。时间久了,T脱落，容易载体自练。如果你的蓝斑比例很高，也要考虑T载体是不是时间太长。条件允许的话，换一下新的载体。
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7楼2008-04-02 16:50:17
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shielie

铁虫 (初入文坛)

10:1后转化的效果

★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):新虫,奖励一下
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
谢谢楼上的各位大虾,小妹的结果如下
编号        结果                                            PCR产物和载体量
1        兰白斑比例适中                                      PCR:3ul---------T-vector :0.5ul
2        兰斑偏多                                             PCR:3ul---------T- vector:0.3ul
3        白斑多，兰斑少                                       Control:2ul--------- T- vector:1ul
4        基本上全是蓝斑，但数量不多                        空载体1ul
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8楼2008-04-03 10:19:50
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shielie

铁虫 (初入文坛)

编号1的结果图片

编号1的结果图片
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9楼2008-04-03 10:54:21
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shielie

铁虫 (初入文坛)

编号2的结果图片

编号2的结果图片
http://freep.cn/p.aspx?u=v20__p_0804031052155175_0.jpg
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10楼2008-04-03 10:55:41
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