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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎样提高T-vector的转化效率阿？
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shielie

铁虫 (初入文坛)

[交流] 怎样提高T-vector的转化效率阿？

各位大虾：小妹想请教一个问题，我做的PCR产物想插入到T-vector(promega公司的）上去，产物长度1900bp,初步筛选用蓝白斑和青霉素抗性，挑选白斑作PCR电泳检测，所选的PCR引物是载体上自带的M13,但是不知道为什么，选的白斑都是假阳性，pcr检测后产物的长度都是300bp，不知道是什么原因
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1楼 2008-03-31 20:28:28
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
挑选转化子,看质粒大小最直观,与空载体对照.
pcr检测后产物的长度都是300bp.一个很可能得原因是你的PCR产物不纯，或者产物被不完全降解。
原则上说好的T载体不该有蓝斑出现或者数量很少，因为末端突出的T不可能连接环化的。时间久了,T脱落，容易载体自练。如果你的蓝斑比例很高，也要考虑T载体是不是时间太长。条件允许的话，换一下新的载体。
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7楼2008-04-02 16:50:17
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lliu

新虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
It was the problem of ligation insteal of transformation.


哈哈哈,是 instead of 吧

[ Last edited by reasonspare on 2008-4-4 at 03:55 ]
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2楼2008-04-01 03:23:46
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碧荷叶

铜虫 (初入文坛)
我也有同样的问题，有时连不上
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3楼2008-04-01 07:41:05
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shielie

铁虫 (初入文坛)

谢谢回复

谢谢各位,我决定将产物和载体的量比例提到到1:10
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4楼2008-04-01 09:39:15
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