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张冰宝

新虫 (小有名气)

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[求助] 目的片段回收后浓度较低，如何浓缩？已有6人参与

我回收了我的目的片段，条带很暗且稍偏高，浓度有些低，连接表达载体一直连接不上，希望可以把我的目的片段浓缩一下。不知道该如何浓缩，希望知道的大侠们指点一下谢谢

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1楼 2014-07-07 16:14:58

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luwei13566

木虫 (正式写手)

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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-22 20:44:17

引用回帖:

30楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-07-21 11:53:16
我做的是双酶切，37度水浴2小时。应该不存在切不开的现象。回收后没测过浓度，因为跑胶条带就不是很亮，所以觉得浓度会比较低。酶切位点甲基化是怎么回事啊？确实不太懂，我应该怎么筛查呢？还请指教。
图中左侧的 ...

1.从图上看，绝对切开了，你是割胶回收后再跑了一个不亮对吧，这个好办，多切个200ul，用透明胶带把你的大梳子粘在一起倒回收胶，这种大点样空至少能点200ul以上，开紫外割胶的时候一定要快，回收少很多问题出在这一步，50度融胶后不要立刻上柱子，晾至室温，离心尽量用温度低点的离心机，也可以反复过柱子都能提高回收效率。
2.从图上看确实有那么点偏大，你用哪两个酶切的？
3.而且以这个亮度就算回收效率再低也不至于二次PCR做不出来的地步。二次PCR加了多少模板？强烈建议LZ去测个回收后的浓度