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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 目的片段回收后浓度较低，如何浓缩？
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张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 目的片段回收后浓度较低，如何浓缩？ 已有6人参与

我回收了我的目的片段，条带很暗且稍偏高，浓度有些低，连接表达载体一直连接不上，希望可以把我的目的片段浓缩一下。不知道该如何浓缩，希望知道的大侠们指点一下 谢谢
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1楼 2014-07-07 16:14:58
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-22 20:44:17
引用回帖:
30楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-07-21 11:53:16
我做的是双酶切，37度水浴2小时。应该不存在切不开的现象。回收后没测过浓度，因为跑胶条带就不是很亮，所以觉得浓度会比较低。酶切位点甲基化是怎么回事啊？确实不太懂，我应该怎么筛查呢？还请指教。
图中左侧的 ...

1.从图上看，绝对切开了，你是割胶回收后再跑了一个不亮对吧，这个好办，多切个200ul，用透明胶带把你的大梳子粘在一起倒回收胶，这种大点样空至少能点200ul以上，开紫外割胶的时候一定要快，回收少很多问题出在这一步，50度融胶后不要立刻上柱子，晾至室温，离心尽量用温度低点的离心机，也可以反复过柱子都能提高回收效率。
2.从图上看确实有那么点偏大，你用哪两个酶切的？
3.而且以这个亮度就算回收效率再低也不至于二次PCR做不出来的地步。二次PCR加了多少模板？强烈建议LZ去测个回收后的浓度
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大家相互帮助哈
31楼2014-07-21 12:15:00
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for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
张冰宝(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-07 20:38:27
简单点的就是用胶回收盒子里面的柱子重新富集一遍

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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操蛋的XX
2楼2014-07-07 16:19:56
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-07-22 20:43:59
我们实验室有专门抽真空的仪器呢

[ 发自小木虫客户端 ]
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天道酬勤
3楼2014-07-07 23:12:13
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_深海渔_

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by for5 at 2014-07-07 16:19:56
简单点的就是用胶回收盒子里面的柱子重新富集一遍

我最近也遇到这方面问题，您能详细的讲一下吗？把纯化回收的DNA溶液放到柱子里然后重新离心吗？谢谢！

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-07-08 00:00:30
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