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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 想用色谱定量癌细胞中的DNA，但有好多问题不懂，请各位前辈帮帮忙吧，实验做不动了
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
引用回帖:
20楼: Originally posted by k1040348263 at 2014-07-05 08:54:26
我并不是要测正常基因组DNA含量，只要能测定就行了...

不提取出肿瘤细胞的DNA，无法测定其含量，因为肿瘤细胞而编制之后，其DNA组成与非恶变前不一样。
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21楼2014-07-05 13:13:53
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
我的意思是你的培养的细胞如果是正常细胞，你还可以从数据库中直接查出细胞的基因组信息，你培养的是肿瘤细胞，在数据库中未必有其基因组信息，如果你只是想知道肿瘤细胞的染色体水平的情况，可以用吉姆萨染色方法等细胞遗传学染色手段，对于染色体染色，包括分带型染色，然后可以用光学显微镜观察，但是也要粉碎细胞。
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22楼2014-07-05 13:20:53
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
流式细胞仪能够检测出细胞中的DNA含量，还能够精确到个位数测定出特定标记DNA、RNA或者某种蛋白质的细胞的数量，并且将此种细胞从细胞群体中分拣出来。我以前说的不对。
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23楼2014-07-07 21:47:57
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
流式细胞术原理与应用教程.pdf

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5788334&fpage=2&target=blank
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24楼2014-07-07 21:50:48
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
请楼主就是用流式细胞仪检测癌细胞的DNA含量，可以定量检测，还可以精确只计算出细胞的个数，并且分离出需要的细胞。操作手册在24楼，还需要可在站内搜索，或想我本人索要，我手里有不少，改日传上来供网友们分享，今天来不及了，这几天都要开会。

楼主不要考虑使用色谱了，太麻烦；也不必考虑我原来说的分析细胞后提取DNA后用光度法测定DNA含量，因为我原来的方法要提取DNA，这已经比较麻烦，而且还要同时精确测定对应提取的DNA的癌细胞的精确个数，如果不用流式细胞仪，仅仅使用光镜对于取出的液体样品进行计数，而后通过样品体积是光镜观察的液滴体积之比推算出样品的肿瘤细胞的个数，理论上可行，但是操作上恐怕只能达到数量级水平，误差较大。
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25楼2014-07-08 01:06:44
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
更正：“分析细胞‘是”粉碎细胞“。
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26楼2014-07-08 01:07:48
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
楼主请看：
T. S. Hawley and R. G. Hawley edit , Flow Cytometry Protocols, Humana Press Inc., Totowa, NJ，2004 ,2nd ed 的 Chapter 20. Solid Tumor DNA Content Analysis，是关于用流式细胞仪进行实体肿瘤细胞的DNA含量分析的具体protocols,楼主也可以参考该书第21章.

全书下载：
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7637366

这样那个楼主的实验可以进行下去了。
想用色谱定量癌细胞中的DNA，但有好多问题不懂，请各位前辈帮帮忙吧，实验做不动了
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27楼2014-07-09 23:26:03
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
不好意思，对于楼主的问题，我连续答错了好几次，今天才纠正过来。
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28楼2014-07-09 23:32:02
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k1040348263

金虫 (正式写手)
引用回帖:
28楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-07-09 23:32:02
不好意思，对于楼主的问题，我连续答错了好几次，今天才纠正过来。

我已经买试剂盒了，算了，我就这么做吧
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29楼2014-07-11 21:11:42
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k1040348263

金虫 (正式写手)
引用回帖:
25楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-07-08 01:06:44
请楼主就是用流式细胞仪检测癌细胞的DNA含量，可以定量检测，还可以精确只计算出细胞的个数，并且分离出需要的细胞。操作手册在24楼，还需要可在站内搜索，或想我本人索要，我手里有不少，改日传上来供网友们分享， ...

我能再问你一个问题吗？用试剂盒提取的DNA，提取率高吗，能达到多少？就是说提取出的DNA的量比真实DNA的量（回收率）高吗
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30楼2014-07-19 16:05:38
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