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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 想用色谱定量癌细胞中的DNA，但有好多问题不懂，请各位前辈帮帮忙吧，实验做不动了
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seatop

银虫 (小有名气)
将DNA使用10%酸水解30min，水解后调整pH至中性
DNA水解成为核苷酸、核苷、碱基。
然后使用液相色谱作定量。
工作量较大。
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11楼2014-07-04 14:45:53
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k1040348263

金虫 (正式写手)
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11楼: Originally posted by seatop at 2014-07-04 14:45:53
将DNA使用10%酸水解30min，水解后调整pH至中性
DNA水解成为核苷酸、核苷、碱基。
然后使用液相色谱作定量。
工作量较大。

哦，那我可能做不了，这个实验只是我整个大实验中的一小步，我只想做个小实验，不想研究那么久。还是很感谢
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12楼2014-07-04 19:14:55
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k1040348263

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-07-04 10:16:03
即使如此，酶切DNA之后是无法测定出DNA浓度的，酶切DNA的反应不可能是100%，是100%，其产物的浓度也不反映原来的DNA浓度。

目前的技术水平，没有你说的可能，虽然活细胞成像技术试图利用生物大分子的本地荧光进 ...

请教一下流式细胞仪能定量DNA浓度吗？不是100%也可以，精确度较大就行啊，还有显微荧光测定，可以吗，因为我不是搞生物的，很多问题不懂，我觉得你应该是这方面的专家，教教我吧。
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13楼2014-07-04 19:26:02
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k1040348263

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by pudding9696 at 2014-07-04 14:26:26
楼主参考下这个 也许能找到答案 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7467723&fpage=1

不好意思，我的金币数估计初始设错了。现在应该改过来了
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14楼2014-07-04 20:06:41
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
k1040348263: 金币+2, ★有帮助 2014-07-05 08:47:42
色谱仪在一定情况下可以通过测定其分离峰的面积对出对应的物质的摩尔数量和浓度（后者用前者除一下样品原始体积即可），现在色谱工作站有专门的设备和程序自动完成分离峰的面积的计算。

请教一下流式细胞仪能定量DNA浓度吗？我本人目前尚未没有听说过流式细胞仪已经发展到能够直接测定细胞内的DNA浓度了。你可以通过流式细胞仪分离出有关的特定的细胞，然后粉碎细胞而并且提取出测定其中的总DNA的含量，因为肿瘤细胞在形成肿瘤后其基因组与未肿瘤化的基因组不一样。
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15楼2014-07-04 22:58:53
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
k1040348263: 金币+3, ★有帮助 2014-07-05 08:50:14
测定DNA含量为什么一定要水解其为单个脱氧核苷酸？？！！不嫌累的慌！再说，怎么保证一定能够彻底水解为单个脱氧核苷酸，无论是有机反应还是生化反应。当然，直接用色谱测不了细胞的总DNA的浓度，因为很难形成各个独立的分离峰，也就无法准确的计算出每个分离峰的面积，对于肿瘤细胞而言，其基因组DNA有多态性，不是原来的人类基因组的染色体对应的DNA。
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16楼2014-07-04 23:03:57
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

对于肿瘤细胞而言，其基因组DNA有多态性，不是原来的人类基因组的染色体对应的DNA，即使能够完全水解为脱氧核苷酸，又如何直接从色谱峰确定N个的已经突变的基因组DNA的脱氧核苷酸的含量哪？
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17楼2014-07-04 23:06:16
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k1040348263

金虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-07-04 22:58:53
色谱仪在一定情况下可以通过测定其分离峰的面积对出对应的物质的摩尔数量和浓度（后者用前者除一下样品原始体积即可），现在色谱工作站有专门的设备和程序自动完成分离峰的面积的计算。

请教一下流式细胞仪能定量 ...

我是测定自己养的癌细胞中DNA的浓度，还需要粉碎然细胞吗，那也不能直接测定DNA含量吗
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18楼2014-07-05 08:49:44
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k1040348263

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-07-04 23:03:57
测定DNA含量为什么一定要水解其为单个脱氧核苷酸？？！！不嫌累的慌！再说，怎么保证一定能够彻底水解为单个脱氧核苷酸，无论是有机反应还是生化反应。当然，直接用色谱测不了细胞的总DNA的浓度，因为很难形成各个独 ...

是的，很麻烦，因为我这里仪器有限，所以先从有的仪器中考虑。
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19楼2014-07-05 08:51:21
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k1040348263

金虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-07-04 23:06:16
对于肿瘤细胞而言，其基因组DNA有多态性，不是原来的人类基因组的染色体对应的DNA，即使能够完全水解为脱氧核苷酸，又如何直接从色谱峰确定N个的已经突变的基因组DNA的脱氧核苷酸的含量哪？

我并不是要测正常基因组DNA含量，只要能测定就行了
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20楼2014-07-05 08:54:26
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