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863828916

金虫 (正式写手)


[求助] Saccharomyces cerevisiae的聚合酶Polδ及其RFC的重组表达 已有1人参与

跪求Saccharomyces cerevisiae的聚合酶Polδ及其RFC的重组表达载体,目前从论文查到RFC可以用原核表达共表达,但是载体是作者自己设计改造的,有没有虫友做过它们的表达纯化啊?能否分享一下这些重组载体啊?解决了加200积分
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863828916

金虫 (正式写手)


引用回帖:
3楼: Originally posted by pennchem at 2014-07-05 11:00:27
yeast RFC五个亚基,J Kuriyan已经结晶出来了吧,五个亚基放在两个质粒上在大肠杆菌里表达的吧,不怕麻烦的话,自己构建吧,或者你找他们索要质粒,至于poldelta还是用酵母表达的吧,Peters,Burger在这方面应该是大 ...

RFC却是是两个质粒上表达的,但是论文中那个构建真的很麻烦,发邮件问了原作者,但是貌似2天了没有回我,不知道你有没有这个构建好的重组质粒啊?或者你知道国内谁有啊?
4楼2014-07-05 22:08:26
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
863828916(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-05 19:04:54
863828916: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-07-05 22:08:44
yeast RFC五个亚基,J Kuriyan已经结晶出来了吧,五个亚基放在两个质粒上在大肠杆菌里表达的吧,不怕麻烦的话,自己构建吧,或者你找他们索要质粒,至于poldelta还是用酵母表达的吧,Peters,Burger在这方面应该是大拿吧。
行至水穷处,坐看云起时
3楼2014-07-05 11:00:27
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
863828916(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-16 13:26:48
国内做这个系统的人很少啊,你要纯化RFC,poldelta, 是不是还要纯化PCNA,RPA?

这其中,貌似PCNA也是大肠杆菌也可以高量表达。

RFC就五个亚基,有用两个质粒,也有用三个质粒的,既然你选择了一个复杂的系统,这点工作的确是复杂,或者你可以找公司替你做。

PS,如果实验室不是具有足够的能见度,找别人要质粒,很难得到别人的回应,记得附上自己付费的FedEX or UPS 号码,让别人寄一个质粒已经是难得,还要让人费钱,就有点过了。
行至水穷处,坐看云起时
5楼2014-07-06 10:12:55
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