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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » Saccharomyces cerevisiae的聚合酶Polδ及其RFC的重组表达
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863828916

金虫 (正式写手)

[求助] Saccharomyces cerevisiae的聚合酶Polδ及其RFC的重组表达 已有1人参与

跪求Saccharomyces cerevisiae的聚合酶Polδ及其RFC的重组表达载体，目前从论文查到RFC可以用原核表达共表达，但是载体是作者自己设计改造的，有没有虫友做过它们的表达纯化啊？能否分享一下这些重组载体啊？解决了加200积分
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1楼 2014-07-03 16:45:21
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863828916

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pennchem at 2014-07-05 11:00:27
yeast RFC五个亚基，J Kuriyan已经结晶出来了吧，五个亚基放在两个质粒上在大肠杆菌里表达的吧，不怕麻烦的话，自己构建吧，或者你找他们索要质粒，至于poldelta还是用酵母表达的吧，Peters，Burger在这方面应该是大 ...

RFC却是是两个质粒上表达的，但是论文中那个构建真的很麻烦，发邮件问了原作者，但是貌似2天了没有回我，不知道你有没有这个构建好的重组质粒啊？或者你知道国内谁有啊？
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4楼2014-07-05 22:08:26
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
863828916(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-05 19:04:54
863828916: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-07-05 22:08:44
yeast RFC五个亚基，J Kuriyan已经结晶出来了吧，五个亚基放在两个质粒上在大肠杆菌里表达的吧，不怕麻烦的话，自己构建吧，或者你找他们索要质粒，至于poldelta还是用酵母表达的吧，Peters，Burger在这方面应该是大拿吧。
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行至水穷处，坐看云起时
3楼2014-07-05 11:00:27
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
863828916(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-16 13:26:48
国内做这个系统的人很少啊，你要纯化RFC，poldelta, 是不是还要纯化PCNA，RPA？

这其中，貌似PCNA也是大肠杆菌也可以高量表达。

RFC就五个亚基，有用两个质粒，也有用三个质粒的，既然你选择了一个复杂的系统，这点工作的确是复杂，或者你可以找公司替你做。

PS，如果实验室不是具有足够的能见度，找别人要质粒，很难得到别人的回应，记得附上自己付费的FedEX or UPS 号码，让别人寄一个质粒已经是难得，还要让人费钱，就有点过了。
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行至水穷处，坐看云起时
5楼2014-07-06 10:12:55
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