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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 求大家帮我看看wb的胶片，求解决办法
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mulongyan

新虫 (初入文坛)

[求助] 求大家帮我看看wb的胶片，求解决办法 已有3人参与

SDS-PAGE浓缩胶4%，12.5%。蛋白Marker。每泳道上样40μg。首先90V电泳30min，后120V电泳2h。300mM，转膜2h。无蛋白快速封闭液封闭3-5分钟；加入anti-pepc,anti-rubscio一抗（1:1000）室温1-4hr。TBST洗涤3次，每次10min。之后二抗（1:3000）孵育1h，TBST洗涤3次，最后TBS洗1次，每次10min 。在保鲜膜上，平铺膜，加ECL发光液（29050，Engreen），然后暗室曝光检测。羊抗兔HRP标记IgG。曝光后，膜放进丽春红染色液染色，拍照。
这两个一抗都是多克隆抗体，每个片子上都出现了其他的条带？这属于正常现象？能不能把其他的条带去掉呢？
  谢谢，大家

求大家帮我看看wb的胶片，求解决办法
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1楼 2014-07-03 15:31:07
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mulongyan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-07-04 11:22:18
问题太多：封闭时间短，一抗孵育室温时间长，二抗浓度高（通常用的二抗是1:5000 - 10000）

楼主，这个片子其实是我找公司做的，做成这样我都不知道如何跟老板交代。。
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4楼2014-07-24 11:08:23
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-04 11:37:28
mulongyan: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-07-24 11:07:29
问题太多：封闭时间短，一抗孵育室温时间长，二抗浓度高（通常用的二抗是1:5000 - 10000）
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2楼2014-07-04 11:22:18
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pudding9696

无虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币-10, 应助指数-1, 屏蔽内容, 违规存档, 广告 2014-07-04 15:22:43
本帖内容被屏蔽
3楼2014-07-04 14:27:56
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mulongyan at 2014-07-24 11:08:23
楼主，这个片子其实是我找公司做的，做成这样我都不知道如何跟老板交代。。...

找公司交代
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5楼2014-07-24 11:10:04
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