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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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沙伯略

捐助贵宾 (正式写手)

[求助] Transwell做荧光黄等标记物测量Papp值时,能用PBS代替HBSS吗? 已有2人参与

各位虫友:我的实验是将Caco-2细胞接种到Transwell上,培养21天,期间测量跨膜电阻抗值(TEER),建立肠上皮紧密连接模型。到达18-23天左右,TEER值约为600-800Ω(而在第13天TEER达到最大值1800Ω,之后,逐渐下降,到21天,TEER下降到600-1000Ω,此时做了荧光黄通透性实验),现欲验证紧密连接的完整性,故利用荧光黄来检测表观通透性(Papp)。Transwell上室加0.5ml的200ug/ml荧光黄(PBS为溶剂),下室加1.5mlPBS,培养箱中孵育1h后,在下室取样1ml,利用荧光分光光度计推算透过Transwell的荧光黄浓度(线性提前已做好,在线性范围内。Papp值刚好在n*10^-6cm/s(n=2,3,4,5,6,7),即papp刚好处在10^-6cm/s数量级上,并未达到文献所述的小于10^-6cm/s的要求。
             请问,问题出在哪里呢?
       是紧密连接模型未达到要求(如前所述,电阻值在13天达最大值后又逐渐下降)还是因为透过性试验不能用PBS,只能用HBSS?(因为我看到文献里面一般用HBSS做荧光黄通透性实验)。
           敬请各位同道不吝赐教啊~~~
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向前出发,永远向前!
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幸福花儿开

新虫 (正式写手)

楼主你好,不知道你的问题解决了吗?我最近也在做caco-2细胞的渗透性试验,不知道可否请教一下?我查的sigma公司有三种荧光黄试剂(Lucifer Yellow CH dipotassium salt;Lucifer Yellow CH dilithium salt;Lucifer Yellow CH dilithium salt),不知道该买哪种?请问楼主买的哪种啊 ?
11楼2018-07-14 19:49:29
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沙伯略

捐助贵宾 (正式写手)

大虫们都在忙什么呢???给个意见啊~~~
向前出发,永远向前!
2楼2014-07-05 19:21:30
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独来独往000

铁虫 (小有名气)

有些细胞荧光负载液最好用HBSS~
3楼2014-07-07 16:31:59
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沙伯略

捐助贵宾 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 独来独往000 at 2014-07-07 16:31:59
有些细胞荧光负载液最好用HBSS~

为什么呢?都是缓冲液啊~为保险起见,我配制荧光黄就用完全培养基行吗?
向前出发,永远向前!
4楼2014-07-07 22:14:13
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