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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 原核表达
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

[交流] 原核表达

各位大侠，你们做原核表达在连接那一步，挑取正确重组子的比率是多少，我今天挑了二十个做菌液PCR，只有一个出来，也不知道正确不正确。
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1楼 2008-03-29 16:56:09
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
送去测序啊
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帮助虫友，提升自己
2楼2008-03-29 16:59:34
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asr

荣誉版主 (知名作家)
可以再酶切验证一下

一般选中间，大小均一的菌落，可能要好点。
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思想极度邪恶，勿怕勿怪！\(^o^)/~
3楼2008-03-29 17:20:51
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wuhuifang909

金虫 (初入文坛)
我也在做这个，开始还长了一些菌斑，但没有阳性的。又做了好几次，却连一个斑都不长了，郁闷阿
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4楼2008-03-30 09:44:42
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bijiaoyingyang

金虫 (小有名气)
那你的转化效率确实不高啊，可以从新转化，或者直接PCR检测出现的较少的阳性克隆。。我做原核的时候，经常选个体比较大的菌落，结果还比较如意。有时候选择个体中等，大小均一的菌落，也可以得到较好的效果。反正都要经过PCR检测。检测后有条带的，而且是比较亮的条带的模板菌体送出去测序就可以了。
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5楼2008-03-30 10:29:20
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU
挑取正确重组子的比率好像没有固定的。菌液的PCR可能有时候不太准的。呵呵。测序最好了。
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活着就要让人感受到你的存在。
6楼2008-03-30 10:44:04
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sunyunhappy

铜虫 (小有名气)
影响连接效率的因素很多的，没有一个确切的比率
只要有你想要的，一个阳性克隆就足够了
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7楼2008-03-30 11:03:26
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sxxuan

金虫 (著名写手)
我之前做的PCR没有条带，但是提取质粒后酶切也有目的基因的片段
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你的日子如何，你的力量也必如何！
8楼2008-03-30 11:20:42
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