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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 酶活测定
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富硒贡茶

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶活测定 已有5人参与

酶活测定过程中背景的OD值（灭酶活的OD）很大，扣除背景后计算酶活就很少了。。。。。为什么，既然酶液中有还原糖，肯定是被降解的，为什么计算的酶活还很低
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1楼 2014-07-01 12:19:53
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kaihui99

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2014-07-01 23:01:42
OD值范围0.2~0.8之内算是精准的。
你用溶剂(水）对照一下，是不是在这个范围之内？
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2楼2014-07-01 17:20:43
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富硒贡茶

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kaihui99 at 2014-07-01 17:20:43
OD值范围0.2~0.8之内算是精准的。
你用溶剂(水）对照一下，是不是在这个范围之内？

是在此范围内，比如酶与底物反应后OD为0.5，那么对照组背景中的OD就有0.3。。。。。。。。背景中的还原糖是被降解得来的，说明酶活应该很高，但实测却很少
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3楼2014-07-01 20:30:46
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1037053695

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也遇到了同样的问题 ，我测得是蛋白酶活 用的国标，背景跟样品的OD相差很少，酶活不低啊，颜色挺深的
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4楼2014-07-02 09:23:05
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liuyi8203

金虫 (小有名气)
最近我也在测酶活，请问你用的空白对照是“水”还是“空白培养基”，我用空白培养基之后实验组出现了负值，难道接了菌的培养基比没有接菌的培养基酶活还低？（此酶就胞外酶），求解释....
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5楼2014-07-02 16:50:35
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a908363630

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
灭活后的OD值还很大，很明显你的对照本身就含有能显色的物质啊。。比如我测果胶酶，，可是配制培养基里加入了葡萄糖（还原糖），直接导致灭活后，由于葡萄糖的存在，还原糖仍然有吸光值啊。所以说，背景的OD值大，不一定说明你的酶活有多高，还有可能是你自己本身加入的。。不知道你测得什么酶，仅供参考哈。。
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一个人，你做不了什么
6楼2014-07-02 17:38:51
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富硒贡茶

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by a908363630 at 2014-07-02 17:38:51
灭活后的OD值还很大，很明显你的对照本身就含有能显色的物质啊。。比如我测果胶酶，，可是配制培养基里加入了葡萄糖（还原糖），直接导致灭活后，由于葡萄糖的存在，还原糖仍然有吸光值啊。所以说，背景的OD值大，不 ...

额，我没有加其他什么还原糖额
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7楼2014-07-06 11:57:54
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a908363630

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 富硒贡茶 at 2014-07-06 11:57:54
额，我没有加其他什么还原糖额...

不知道你测得什么酶
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一个人，你做不了什么
8楼2014-07-06 15:33:31
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liuyi8203 at 2014-07-02 16:50:35
最近我也在测酶活，请问你用的空白对照是“水”还是“空白培养基”，我用空白培养基之后实验组出现了负值，难道接了菌的培养基比没有接菌的培养基酶活还低？（此酶就胞外酶），求解释....

我也出现过负值，真心不懂是什么情况
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9楼2014-07-06 21:19:40
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富硒贡茶

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by a908363630 at 2014-07-06 15:33:31
不知道你测得什么酶...

β-甘露聚糖酶
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10楼2014-07-07 19:49:37
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