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富硒贡茶

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶活测定 已有5人参与

酶活测定过程中背景的OD值(灭酶活的OD)很大,扣除背景后计算酶活就很少了。。。。。为什么,既然酶液中有还原糖,肯定是被降解的,为什么计算的酶活还很低
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kaihui99

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2014-07-01 23:01:42
OD值范围0.2~0.8之内算是精准的。
你用溶剂(水)对照一下,是不是在这个范围之内?
2楼2014-07-01 17:20:43
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富硒贡茶

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kaihui99 at 2014-07-01 17:20:43
OD值范围0.2~0.8之内算是精准的。
你用溶剂(水)对照一下,是不是在这个范围之内?

是在此范围内,比如酶与底物反应后OD为0.5,那么对照组背景中的OD就有0.3。。。。。。。。背景中的还原糖是被降解得来的,说明酶活应该很高,但实测却很少
3楼2014-07-01 20:30:46
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1037053695

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也遇到了同样的问题 ,我测得是蛋白酶活 用的国标,背景跟样品的OD相差很少,酶活不低啊,颜色挺深的
4楼2014-07-02 09:23:05
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liuyi8203

金虫 (小有名气)

最近我也在测酶活,请问你用的空白对照是“水”还是“空白培养基”,我用空白培养基之后实验组出现了负值,难道接了菌的培养基比没有接菌的培养基酶活还低?(此酶就胞外酶),求解释....
5楼2014-07-02 16:50:35
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a908363630

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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灭活后的OD值还很大,很明显你的对照本身就含有能显色的物质啊。。比如我测果胶酶,,可是配制培养基里加入了葡萄糖(还原糖),直接导致灭活后,由于葡萄糖的存在,还原糖仍然有吸光值啊。所以说,背景的OD值大,不一定说明你的酶活有多高,还有可能是你自己本身加入的。。不知道你测得什么酶,仅供参考哈。。
一个人,你做不了什么
6楼2014-07-02 17:38:51
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富硒贡茶

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by a908363630 at 2014-07-02 17:38:51
灭活后的OD值还很大,很明显你的对照本身就含有能显色的物质啊。。比如我测果胶酶,,可是配制培养基里加入了葡萄糖(还原糖),直接导致灭活后,由于葡萄糖的存在,还原糖仍然有吸光值啊。所以说,背景的OD值大,不 ...

额,我没有加其他什么还原糖额
7楼2014-07-06 11:57:54
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a908363630

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 富硒贡茶 at 2014-07-06 11:57:54
额,我没有加其他什么还原糖额...

不知道你测得什么酶
一个人,你做不了什么
8楼2014-07-06 15:33:31
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一个不小心就

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by liuyi8203 at 2014-07-02 16:50:35
最近我也在测酶活,请问你用的空白对照是“水”还是“空白培养基”,我用空白培养基之后实验组出现了负值,难道接了菌的培养基比没有接菌的培养基酶活还低?(此酶就胞外酶),求解释....

我也出现过负值,真心不懂是什么情况
9楼2014-07-06 21:19:40
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富硒贡茶

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by a908363630 at 2014-07-06 15:33:31
不知道你测得什么酶...

β-甘露聚糖酶
10楼2014-07-07 19:49:37
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