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hbl215金虫 (文坛精英)
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关于噬菌体展示技术的一些问题 已有4人参与
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最近在学习基因重组跟噬菌体展示技术这一块,完全小白一枚,再看文献中有几个问题想请教: 1.从杂交瘤细胞中提取总RNA反转录成CDNA,再设计带有poly-C尾巴的anchor引物作为5’端引物扩增抗体的可变区,这里的5’端引物是不是仅靠这些G-C配对就可以延伸呢,如果是的话至少需要多少碱基配对就可以保证延伸? 2.3’端的基因特异性引物是以FR4为模板设计的么,还是其他的设计方案?或者3’端引物以恒定区序列为模板设计,先扩增出整个重轻链基因,再通过基因序列比对,除去一样的恒定区序列,剩下的就是可变区序列? 3.在噬菌体库的富集筛选中,为什么富集到最后一轮,库容量越来越大呢?我的理解是筛去原始库中的一些不结合的噬菌体后,库应该越来越小呀,最后浓缩出高结合力的精华呀。 希望做过的懂得的帮我解释一下,小白不胜感激! |
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