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hbl215

金虫 (文坛精英)

[求助] 关于噬菌体展示技术的一些问题 已有4人参与

最近在学习基因重组跟噬菌体展示技术这一块,完全小白一枚,再看文献中有几个问题想请教:
1.从杂交瘤细胞中提取总RNA反转录成CDNA,再设计带有poly-C尾巴的anchor引物作为5’端引物扩增抗体的可变区,这里的5’端引物是不是仅靠这些G-C配对就可以延伸呢,如果是的话至少需要多少碱基配对就可以保证延伸?
2.3’端的基因特异性引物是以FR4为模板设计的么,还是其他的设计方案?或者3’端引物以恒定区序列为模板设计,先扩增出整个重轻链基因,再通过基因序列比对,除去一样的恒定区序列,剩下的就是可变区序列?
3.在噬菌体库的富集筛选中,为什么富集到最后一轮,库容量越来越大呢?我的理解是筛去原始库中的一些不结合的噬菌体后,库应该越来越小呀,最后浓缩出高结合力的精华呀。
希望做过的懂得的帮我解释一下,小白不胜感激!
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环境增值联盟

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

2014化学生物学与一氧化氮(NO)国际会议      大会官网:http://broadway.sjtu.edu.cn,2014年7月4-6日,上海。议题:化学生物学、NO、组学(NO仅为议题中的三分之一)。诺贝尔医学奖获得者Ferid Murad教授担任大会名誉主席,科技部原副部长程津培院士担任大会主席。
13楼2014-06-27 13:29:18
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hbl215

金虫 (文坛精英)

高手在哪里呀,等待解答
4楼2014-06-25 16:16:11
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wersdu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
hbl215: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-26 09:30:29
第三个问题,一般在第一轮、第二轮富集过程中,库容不会有明显的增加,第三轮富集库容一般会增加2-3个数量级,是与抗原结合的噬菌体大量拷贝,测序后会发现大量重复克隆。
5楼2014-06-26 08:48:02
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hbl215

金虫 (文坛精英)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wersdu at 2014-06-26 08:48:02
第三个问题,一般在第一轮、第二轮富集过程中,库容不会有明显的增加,第三轮富集库容一般会增加2-3个数量级,是与抗原结合的噬菌体大量拷贝,测序后会发现大量重复克隆。

哦,明白了,那在每一轮的筛选,是把整个库全部筛,还是扩增后取部分出来筛,其余的保存?同样,最后一轮后测序也是扩增后选取部分测序么?
6楼2014-06-26 09:29:58
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